体外瞬时转染TIMP-1基因促进成纤维细胞增殖

摘要

目的:探讨体外瞬时转染组织型金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)质粒对小鼠成纤维细胞细胞周期和增殖的影响.方法:构建表达小鼠TIMP-1的质粒,体外转染小鼠成纤维细胞NIH3T3,以转染空质粒的NIH3T3细胞作对照,采用RT-PCR和Western印迹分析检测TIMP-1在基因和蛋白质水平的表达;采用BrdU法和MTT法检测细胞增殖能力和活力;流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:转染TIMP-1质粒的NIH3T3细胞在24 h即有明显的TIMP-1 mRNA表达和蛋白质表达上调;与转染空质粒的NIH3T3细胞相比,转染TIMP-1质粒的NIH3T3细胞48 h的BrdU摄取率显著升高(P＜0.01),72 h的MTT摄取率显著升高(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示与转染空质粒的细胞相比,72 h时TIMP-1质粒转染组G0/G1期细胞显著减少(P＜0.01),S期细胞比例显著升高(P＜0.01).结论:体外瞬时转染TIMP-1质粒可以有效地使TIMP-1的基因和蛋白质水平在NIH3T3细胞高表达,TIMP-1高表达显著提高细胞BrdU和MTT摄取率,减少G0/G1期细胞比例,提高S期细胞比例,提示TIMP-1高表达能够促进成纤维细胞增殖,从而加速间质纤维化的进程.