核心启动子部分缺失的乙型肝炎病毒基因的真核克隆及其意义

摘要

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(CP)20/21 bp部分缺失(nt 1 748/1 747至nt 1 767)及同时存在的A1896点变异真核载体,以进一步研究其对病毒复制与转录的影响.方法利用线性化的、从CP上游顺序开始的、含完整转录单元的HBV基因克隆(P3.8 I质粒)为工具,采用分子克隆、人工定点突变等技术构建突变重组载体.用脂质体法将重组载体转染HepG2细胞,提取细胞内DNA和RNA分别进行Southern blot、Northern blot分析.结果经聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)初步鉴定和测序最终鉴定,突变重组载体构建成功;重组载体转染HepG2细胞后,提取细胞内DNA的Southern b10t分析及细胞内RNA的Northern blot分析结果,均提示各变异株较野生株的HBV DNA复制水平及前C/前基因组mRNA、前S/SmRNA转录水平均显著下降.结论HBV CP 20/21 bp部分缺失株及同时存在的A1896点变异株的病毒复制及转录水平均较野株显著下降.