乙型脑炎病毒E蛋白基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达

摘要

目的在大肠埃希菌中表达乙型脑炎病毒E蛋白.方法反转录聚合酶链反应(PCR)扩增乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白基因,克隆人原核表达载体pET-28a,转化大肠埃希菌BL21(ED3).经异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹分析表达产物.结果本室所保存毒株的E蛋白与已发表的序列比较,有5个核苷酸改变,可分别导致氨基酸替代.所表达的E蛋白的相对分子质量约为50 000,表达量约占菌体总蛋白的35%.结论在大肠埃希菌中成功地表达了JEV E蛋白,为制备JE实验室诊断抗原和分析E蛋白基因结构与功能的关系打下了基础.