慢病毒介导NFAT基因对HepG2细胞生物学行为的影响

摘要

目的:观察人HepG2细胞转染载有NFAT-shRNA载体的慢病毒对HepG2细胞生物学行为的影响。方法:设计3种针对NFAT基因的shRNA的干扰序列及阴性对照序列,采用稳定转染的方式构建稳定转染细胞系,挑选出干扰效率最高的shRNA组用于后续实验,采用RT-PCR法检测慢病毒转染后NFAT mRNA及VEGFA mRNA表达情况,Western blot法检测NFAT蛋白及VEGFA蛋白表达量,CCK-8法检测HepG2细胞增殖情况,Transwell法检测细胞迁徙及侵袭能力。结果:3种干扰慢病毒中以shRNA103干扰效果最好。3种NFAT-shRNA干扰作用后,NFAT、VEGFA mRNA及蛋白水相对于对照组降低(P<0.05),阴性对照组未见明显变化。CCK-8结果显示干扰组细胞增殖能力较对照组受到抑制。Transwell结果显示干扰组细胞迁徙及侵袭能力较对照组均有所下降。结论:通过RNA干扰技术沉默NFAT基因后,其细胞增殖能力及迁徙侵袭能力均下降,其作用可能与调节VEGFA有关,为靶向NFAT基因治疗原发性肝癌提供相关实验依据。