参附注射液通过调控自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用研究

摘要

cqvip:目的:探究参附注射液(SFI)通过调控自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及机制。方法:(1在体实验:将大鼠分为正常对照组、心肌缺血再灌注模型(I/R)组、SFI(5、10和20 mg/kg)组。大鼠采用结扎冠状动脉前降支法再灌注4 h建立心肌缺血再灌注模型。试剂盒检测心肌损伤标记物肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白(c TnⅠ)浓度,检测心肌梗死区域百分比,HE检测心肌组织病理变化,试剂盒检测血清氧化应激分子超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平以及血清IL-6、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度,Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1、p62以及磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)和m TOR的表达水平。(2)离体实验:培养大鼠心肌细胞,经过25、50、100μl/ml的SFI预处理后通过缺糖缺氧/复糖复氧法(OGD/R)诱导心肌细胞损伤,MTT检测细胞活性,试剂盒检测SOD和MDA浓度,Western blot检测LC3、Beclin1和p62的表达;20 nmol/L雷帕霉素处理细胞1 h,Western blot检测p-mTOR和LC3的表达,MTT检测细胞活性。结果:①在体实验:与正常对照组比较,I/R组CK、c TnⅠ和LDH表达量升高(P<0. 01),心肌梗死面积和组织病理变化显著增加(P<0. 01),SOD活性显著降低(P<0. 01),MDA浓度显著升高(P<0. 01),TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著升高(P <0. 01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1表达水平增高(P<0. 01),p62表达水平降低(P<0. 01),p-PI3K/PI3K显著降低(P<0. 01);与I/R组比较,SFI(10、20 mg/kg)组CK、c TnⅠ和LDH表达量降低(P<0. 01),心肌梗死面积和组织病理变化显著减轻(P <0. 05,<0. 01),SOD活性显著升高(P <0. 05,P <0. 01),MDA浓度显著降低(P<0. 05,P<0. 01),TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著降低(P<0. 05,P<0. 01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1表达水平降低(P<0. 05,P<0. 01),p62表达水平升高(P<0. 05,P<0. 01),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/m TOR显著升高(P<0. 05,P<0. 01)。②离体实验:与细胞对照组相比,心肌细胞缺糖缺氧复糖复氧(OGD/R)组心肌细胞活性显著降低(P<0. 01),SOD活性显著降低(P<0. 01),MDA浓度显著升高(P<0. 01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1表达水平显著升高(P<0. 01),p62表达水平显著降低(P<0. 01);与OGD/R组比较,SFI 50和100μl/ml组心肌细胞活性提高(P<0. 05,P<0. 01),SOD活性显著升高(P<0. 05,P<0. 01),MDA浓度降低(P<0. 05,P<0. 01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1表达水平降低(P<0. 05,P<0. 01),p62表达水平显著升高(P<0. 05,P<0. 01)。与未经雷帕霉素处理的SFI (100μl/ml)组比较,SFI+雷帕霉素LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著升高(P<0. 01),细胞活性显著降低(P<0. 01)。结论:SFI能通过调控自噬作用减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,作用机制与PI3K/Akt/m TOR信号通路激活有关。