双氢青蒿素通过调控细胞自噬性死亡增强宫颈癌细胞的化疗敏感性

摘要

目的:探究双氢青蒿素(DHA)对宫颈癌HeLa细胞化疗敏感性的影响及作用机制.方法:用5、10、20μmol/L的DHA处理细胞,CCK8检测细胞存活率;顺铂联合不同浓度DHA处理细胞并检测细胞活性;将细胞分为Control、DHA(20μmol/L)、Cisplatin(10μg/ml)和DHA+Cisplatin组,分别用溶媒、DHA(20μmol/L)、顺铂(10 mg/L)和DHA联合顺铂处理细胞24 h,CCK8检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,免疫荧光检测LC3表达,免疫印迹检测Ki67、Cleaved Caspase-3、Beclin1、LC3、P62、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR、p-Ulk1和Ulk1的表达.结果:DHA处理细胞4 d后,细胞增殖倍数明显降低;DHA(10,20μmol/L)联合顺铂处理细胞后,细胞活性显著降低,并具有量效关系;与Control组比较,DHA(20μmol/L)组Ki67表达水平明显降低,细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3的表达水平明显升高;与Cisplatin组比较,DHA+Cisplatin组Ki67表达水平明显降低,凋亡率和Cleaved Caspase-3的表达水平显著降低;同时,DHA(20μmol/L)组自噬相关蛋白Beclin1的表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及LC3在细胞质的表达率均显著低于Control组,P62的表达水平明显升高;DHA+Cisplatin组细胞Beclin1的表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及LC3在细胞质的表达率与Cisplatin组比较均显著降低,P62的表达水平升高;此外,DHA还能明显升高降低HeLa细胞p-mTOR/mTOR和p-Ulk1/Ulk1的比值.DHA能显著减弱顺铂下调p-mTOR/mTOR和p-Ulk1/Ulk1的作用.结论:DHA能通过激活mTOR/Ulk1信号通路抑制自噬增强宫颈癌HeLa细胞的化疗敏感性.