Rap1b在子宫内膜癌组织中的表达及介导自噬调控人子宫内膜癌细胞化疗敏感性的研究

摘要

目的 检测子宫内膜癌(EC)组织中Ras相关蛋白1 b(Rap1 b)表达,观察其对EC细胞Ishika-wa化疗敏感性的影响及机制.方法 选取2016年9月至2019年1月江门市中心医院诊治的60例EC患者作为研究对象.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EC组织与癌旁组织中Rap1 b mRNA表达,免疫组化染色检测组织中Rap1 b与自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达.建立Ishikawa/DDP耐药细胞株,脂质体介导细胞转染法构建Rap1 b低表达的Ishikawa/DDP细胞,以转染NC-siRNA的Ishikawa/DDP细胞作为阴性转染组,未转染的Ishikawa/DDP细胞作为对照组;qRT-PCR和Western blot检测细胞中Rap1 b的表达;CCK-8实验检测DDP处理后细胞存活率,并计算IC50值;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光染色检测LC3表达;Western blot检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin1及P62蛋白表达.结果 与癌旁组织比较,EC组织中Rap1b mRNA与蛋白表达均升高,Beclin1、LC3表达也升高(P<0.05);与对照组和NC-siRNA组相比,Rap1b-siRNA组细胞中Rap1b mRNA和蛋白相对表达量均下降,25、50、100μmol/L DDP处理后细胞存活率下降,IC50值降低,细胞凋亡率升高,LC3荧光染色强度减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比率下降,Beclin1蛋白表达水平下降而P62蛋白表达水平升高(P<0.05).结论 Rap1 b在EC组织中表达水平较高,降低Rap1 b表达可提高Ishikawa细胞的化疗敏感性,其机制可能与抑制自噬相关.