pBV—IL—6重组质粒的构建及其在E.coli细胞中的超高表达

摘要

本研究通过计算机分析设计、人工合成的寡核苷酸引物进行定点诱变和转译起始区优化,再经 PCR 扩增和体外重组,获得重组质粒 pBV-IL-6,转化大肠杆菌获得重组人白细胞介素6的工程菌 EcoliJM103/pBV-IL-6.结果,表达 IL-6占菌体总蛋白的71%.经 IL-6依赖的小鼠杂交瘤细胞系7TDI 和^(?)H-TdR 掺入法测定表达产物粗提物的 IL-6生物活性为10~6U/L,经凝胶过滤纯化与复性之后 IL-6比活性为10^(?)U/mg.表达产物为缺失 N 端25个氨基酸的人白细胞介素6.