声明
第一章 绪 论
1.1 研究背景
1.1.1 抑癌基因PTEN
1.1.2 抑癌基因PTEN与中枢神经系统
1.1.3 PTEN与PD
1.2 研究目的
1.3 研究方法
1.4 实验思路
1.5 研究意义
第二章 原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN的构建
2.1 实验材料
2.1.2 质粒
2.1.2 宿主菌
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要试剂的配制
2.1.5 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 PTEN引物设计及基因扩增
2.2.2 融合质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN的构建和鉴定
2.3 实验结果
2.4 实验讨论
第三章 原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN转化E.coli BL-21中表达、蛋白纯化及鉴定
3.1 实验材料
3.1.1 质粒
3.1.2 宿主菌
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要试剂的配制
3.1.5 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 E.coli BL-21感受态细胞的制备
3.2.2 原核融合质粒转化E.coli BL-21感受态细胞
3.2.3 诱导蛋白表达
3.2.4 总蛋白的提取
3.2.5 GST标签小量纯化目的蛋白
3.2.6 SDS-PAGE电泳
3.2.7 考马斯亮蓝染胶及脱色
3.3 实验结果
3.4 实验讨论
第四章 真核重组质粒pCDNA3.1-FLAG-PTEN的构建
4.1 实验材料
4.1.1 质粒
4.1.2 宿主菌
4.1.3 主要试剂
4.1.4 主要试剂的配制
4.1.5 主要仪器
4.2 实验方法
4.2.1 PTEN引物设计及基因扩增
4.2.2 融合质粒pCDNA3.1-FLAG-PTEN的构建和鉴定
4.3 实验结果
4.4 实验讨论
第五章 真核重组质粒pCDNA3.1-FLAG-PTEN在HEK 293细胞中的表达
5.1 实验材料
5.1.1 质粒
5.1.2 细胞系
5.1.3 主要试剂
5.1.4 主要试剂的配制
5.1.5 主要仪器
5.2 实验方法
5.2.1 细胞冻存
5.2.2 细胞复苏
5.2.3 细胞传代培养
5.2.4 转染质粒
5.2.5 总蛋白的提取
5.2.6 BCA法蛋白浓度测得及电泳前预处理
5.2.7 SDS-PAGE电泳
5.2.8 封闭
5.2.9 抗体孵育及显色分析
5.2.10 显影、图像分析
5.3 实验结果
5.4 实验讨论
第六章 结论和展望
6.1 实验结论
6.2 工作展望
参考文献
综述:PTEN 在帕金森病不同发病机制中的研究进展
8.1 PTEN的结构和功能
8.2 PTEN在神经系统中的作用及相关通路
8.3 PTEN在帕金森疾病中的调节机制
8.4 结语
综述参考文献
致 谢
第十章 攻读学位期间发表文章和参加课题情况
江苏大学;
