KGla细胞免疫小鼠脾细胞scFv噬菌体展示文库的构建及其表达

摘要

目的:用噬菌体展示技术构建KGla免疫小鼠的脾细胞scFv表达文库.方法:用人髓系白血病细胞系KGla细胞免疫小鼠,取其脾细胞,RT-PCR扩增VH和Vκ基因并克隆入噬菌体展示表达载体,构建scFv文库,并测定文库的库容量和BstN1酶切单个克隆分析文库的多样性.用KGla作为固相抗原,进行四轮吸附-洗脱-富集的筛选,SDS-PAGE检验筛选后文库scFv的呈示表达.结果:文库的库容为3×106cfu,单个克隆的BstN1 Ⅰ酶切图谱显示多样,提示文库的容量和多样性均能满足进一步筛选分离目的基因的需要,筛选后的文库能很好地表达外源scFv.结论:文库的构建为进一步地分离KGla细胞表面分子抗体基因提供了必要而可靠的基础.