鼠抗寻常性天疱疮抗原噬菌体抗体库的构建与筛选

摘要

目的:应用重组噬菌体抗体库技术制备抗寻常性天疱疮抗原(PVA)的单链抗体.方法:用PVA免疫小鼠6 w后,抽取小鼠脾脏细胞RNA,逆转录为cDNA.设计针对小鼠抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的特异性引物,PCR扩增出VH和VL片段.用带有VH3′端、连接肽和VL5′端序列的引物修饰VL得VL′后,与VH进行重叠延伸拼接(splicing by overlap extension,SOE),连接成VH-Linker-VL(ScFv),并大量扩增.此ScFv经限制性内切酶Sfi1和Not1酶切后,以噬粒pCANTAB 5E为载体,构建重组质粒,转导TG1感受态菌,建成库容为1.5×106的噬菌体抗体库,用PVA筛库.结果:构建了抗PVA的特异性单链抗体库,筛选出一高丰度表达单链抗PVA抗体的细胞株.结论:从小鼠噬菌体抗体库中获得特异性的、单克隆的、单链抗PVA噬菌体抗体.