HBsAg腺病毒疫苗载体的构建及293细胞中的包装表达

摘要

目的:HBsAg与腺病毒骨架载体质粒构建,在293细胞中包装表达重组腺病毒颗粒,建立HBsAg腺病毒疫苗.方法:以pEcob-6为模板,PCR扩增目的基因HBsAg,腺病毒穿梭载体PAd-track-cmv与HBsAg重组为PAd-track-cmv-HBs穿梭质粒;腺病毒骨架载体质粒PAd-Easy-1再与PAd-track-cmv-HBs同源重组为PAd-Easy-1-HBs质粒;用脂质体介导的转染法将PAd-Easy-1-HBs转染到293细胞,包装成重组腺病毒颗粒.酶联免疫吸附法测定细胞上清中HBsAg的表达,建立HBsAg腺病毒疫苗.结果:PAd-Easy-1-HBs转染到293细胞中,合成荧光蛋白,荧光显微镜下细胞发绿色荧光.再次感染293细胞,90%以上的细胞脱落.细胞上清液中也测定出有HBsAg的表达.结论:HBsAg腺病毒疫苗载体构建成功,并能在293细胞中完整包装成重组腺病毒颗粒,为免疫动物实验提供条件.