目的:克隆小鼠HMGB1 B box基因,表达具有明显致炎活性的鼠HMGB1 B box蛋白,为深入研究其生物学功能以及新型抗炎制剂的研发奠定基础,也为进一步探讨其与H5N1禽流感病毒性肺炎的相关性奠定了基础.方法:从小鼠的肺脏组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增小鼠HMGB1中的B box的cDNA,构建于载体pMD-18T并进行序列测定,随后构建于原核表达载体pET-28a(+)中.IPTG诱导4小时后可见Mr约13 000的蛋白.经Ni2+ 亲和层析柱纯化获得高纯度的HMGB1 B box 蛋白,然后用此蛋白刺激小鼠外周血单核细胞(PBMCs),作用6小时后用ELISA检测PBMCs释放TNF-α、IL-6的含量.结果:经RT-PCR扩增得到了240 bp的DNA片段,经序列分析与Genebank 中报道的已知序列完全一致;成功构建了含有HMGB1 B box编码序列的原核表达载体;纯化表达的HMGB1 B box蛋白能显著地刺激小鼠PBMCs释放致炎因子TNF-α、IL- 6,具有较好的生物活性.结论:原核表达的小鼠HMGB1 B box蛋白具有较好的生物活性,为进一步研究HMGB1 B box的作用机制以及新型抗炎制剂的研究奠定了基础.
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