活性鉴定

摘要： 该试验旨在研究大鲵(Andrias davidianus)皮肤水溶性蛋白成分及其活性,揭示大鲵皮肤黏液的蛋白组分,鉴定具有潜在功能活性的蛋白质.通过物理和化学刺激的方法收集大鲵皮肤黏液,制备大鲵皮肤黏液水溶性蛋白样品,并通过SDS-PAGE垂直电泳、细菌凝集试验、氧化物清除效率试验以及蛋白质谱Label-free分析大鲵皮肤黏液水溶性蛋白的成分以及活性.结果表明:大鲵皮肤黏液中含有多种水溶性蛋白,分子量介于10～300 kDa之间,其中50 kDa分子量以上蛋白条带较为丰富,在100 kDa分子量以上含有较多蛋白,14 kDa以下蛋白含量较少.大鲵皮肤黏液水溶性蛋白对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABST)2种自由基具有清除能力,说明其具有一定的抗氧化活性.大鲵皮肤黏液水溶性蛋白对大肠杆菌和嗜水气单胞菌2种细菌具有较强的凝集作用,暗示大鲵皮肤水溶性蛋白具有一定的抗菌活性.蛋白质谱Label-free分析表明这些蛋白是由66种蛋白质组成;通过分子注释有20种蛋白与免疫抗病功能相关,2种蛋白与抗氧化活性相关.研究揭示大鲵皮肤黏液水溶性蛋白含有66种蛋白,分子量介于10～300 kDa,活性鉴定结果显示大鲵黏液水溶性蛋白具有抗氧化活性和抗菌活性.

摘要： 为了在体外获得表达量高、储存容易、成本低且免疫活性高的H9N2亚型HA蛋白,利用水稻胚乳表达系统表达HA蛋白.首先,将HA基因根据水稻偏好密码子进行优化,合成到pUC57载体上,通过双酶切、连接将HA基因先后构建到中间载体pMP3和植物表达载体pCAMBIA1300上;再通过电极法将pCAMBIA1300-HA导入到根癌农杆菌EHA105中;然后用农杆菌侵染TP309水稻愈伤组织;最后经潮霉素筛选、分化、生根、移栽至田间种植.利用CTAB法提取叶片基因组DNA,PCR鉴定T0阳性植株;利用Dot Blot和Western Blot检测HA蛋白在水稻胚乳中的表达;提取阳性的T1叶片DNA,通过荧光定量PCR方法筛选纯合植株;利用温汤杀雄剪颖授粉法,将含有HA蛋白的TP309与低谷蛋白水稻杂交;利用Western Blot检测杂交后的T3植株蛋白表达量;利用双抗夹心ELISA方法比较水稻源和昆虫表达HA蛋白的活性.结果显示,成功构建了中间载体pMP3-HA和植物表达载体pCAMBIA1300-HA,且pCAMBIA1300-HA成功导入到根癌农杆菌EHA105中;PCR检测到有66株植株的HA基因成功整合到水稻基因组;Dot Blot和Western Blot检测结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达;利用荧光定量PCR方法,107株T1中筛选到31株纯合植株;Western Blot检测结果表明,杂交后的HA蛋白表达量大幅度提高;双抗夹心ELISA结果证实,水稻胚乳表达的HA蛋白的活性高于杆状病毒-昆虫细胞.

摘要： 为了方便获得大量的有活性rES-CSP融合蛋白,通过优化诱导表达条件,实现融合蛋白rES-CSP的可溶性表达,并纯化后检测其生物学活性,使该融合蛋白作为药用蛋白大规模生产成为可能.首先在常规条件下诱导表达融合蛋白rES-CSP,通过SDS-PAGE电泳分析,选出最优菌株;继而优化诱导温度和诱导时间,Western Blot检测目的 蛋白可溶性表达情况,Ni-NTA亲和层析柱进行纯化后RP-HPLC分析其纯度;CCK-8细胞增殖实验和流式细胞仪检测融合蛋白生物学活性.结果 选出目的 蛋白约占菌体总蛋白43.84％的单克隆菌株为研究对象,在诱导温度为25°C,诱导时间为20 h时,融合蛋白rES-CSP实现可溶性表达,并且可溶性表达量较高.经纯化后获得的rES-CSP融合蛋白纯度达到98％以上;制备的rES-CSP融合蛋白具有抑制肝癌细胞HepG2增殖作用,且与HepG2结合能力较强;为融合蛋白rES-CSP的应用研究奠定基础.

摘要： 构建His-Akt1-pcDNA3.1真核表达载体,于HEK293细胞进行表达,Ni-NTA亲和纯化His-Akt1,并对Akt1进行活性鉴定.以Akt1(全长)-pcDNA3.1重组体为模板,采用PCR扩增目的基因,然后克隆入真核表达载体pcDNA3.1;将His-Akt1-pcDNA3.1转染HEK293细胞表达,Ni-NTA纯化His-Akt1,用SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色及免疫印迹鉴定蛋白纯度;蛋白经透析后,免疫印迹检测Akt1 Ser473和Thr308磷酸化水平.His-Akt1-pcDNA3.1真核表达载体构建成功,在HEK293细胞中高效表达;考马斯亮蓝染色和免疫印迹结果显示,取2 mg过表达His-Akt1的蛋白混合液经Ni-NTA纯化后,加入含100 mmol/L咪唑的洗脱液洗脱,可获得高纯度His-Akt1重组蛋白.上述His-Akt1重组蛋白经透析后,免疫印迹结果显示His-Akt1 Ser473和Thr308磷酸化水平(活化水平)均呈高水平.重组His-Akt1-pcDNA3.1真核表达载体成功构建,且蛋白高表达,His-Akt1经提取纯化后具有较高的酶活性.

摘要： 为制备兔出血症病毒VP60单克隆抗体,利用HEK 293T细胞瞬时表达VP60,免疫Balb/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选获得阳性克隆细胞株-5D11.利用血凝抑制(HI)、间接免疫荧光(IFA)和Western blot等方法对5D11分泌的单克隆抗体活性进行鉴定,并对其识别区域进行了定位.结果显示,5D11能抑制病毒凝集人"O"型红细胞,与杆状病毒表达的VP60蛋白发生特异性抗原抗体反应,且其识别VP60蛋白线性抗原表位,并定位于494 aa-579 aa区段.成功制备了抗VP60蛋白单克隆抗体,为开展病原学检测、流行病学研究等奠定了基础.

摘要： 为发掘新型唾液酸醛缩酶,使其在大肠杆菌中得到高效表达,本研究首次从菌株Pedobacter heparinus中克隆疑似编码唾液酸醛缩酶的PhNeuLy3300基因片段,并构建可自主表达异源蛋白的组成型表达载体pRSF-EM5.在此基础上将克隆的目的基因分别导入该pRSF-EM5载体和常用的诱导型载体pET-30a,构建重组质粒pET30a-PhNeuLy3300和pRSF-EM5-PhNeuLy3300,经大肠杆菌表达系统异源表达目的蛋白,并进一步对两种重组蛋白酶进行电泳分析和活性研究.结果表明:编码唾液酸醛缩酶的基因片段全长为945 bp,共编码314个氨基酸残基;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两种重组蛋白表观分子量约为36.4 kDa,纯化后的pET30a-PhNeuLy3300重组蛋白浓度为3.29 mg/mL,证明经异源表达获得了两种重组目的蛋白酶;活性研究显示两种重组唾液酸醛缩酶均能在1h内催化N-乙酰神经氨酸生成N-乙酰甘露糖胺,证明两种重组蛋白酶均具有较高的活性.

摘要： Objective To study the function of single chain antibody against esophageal cancer cells from phage antibody library and purify the ScFv. Methods Two single chain antibody genes were screened from phage antibody library and respectively connected to pET-28a and pET-SUMO prokaryotic expression vectors. The recombinant vectors were constructed respectively into E. coli BL21 (DE3). The induction conditions of IPTG concentration, time and temperature were optimized. The antibodies against surface antigen of esophageal cancer cells were renaturation by guanidine hydrochloride dilution titration and identified by SDS-PAGE and mass spectrometry. Results The recombinant vectors were successfully constructed. The recombinant strains were identified, the induction conditions were 0.5 mmol/L IPTG, 3 h, 18 t, and the recombinant protein was expressed in the form of inclusion body. The recombinant protein with relative molecular weight of 30 KD and 40 KD. Cell ELISA was used to identify the biological activities of two proteins and esophageal cancer cells. Conclusion The single chain antibody NFC20b and NFC70a can be successfully constructed in the bacteriophage and express the inclusion body and the protein activity can be obtained after purification. It can be used for the research and development of subsequent experiments and testing reagents.%目的 研究噬菌体抗体库中筛选得到的抗食管癌细胞的单链抗体的功能,对单链抗体进行包涵体表达纯化.方法 将从噬菌体抗体库中筛选到的2个单链抗体基因分别连接到pET-:28a、pET-SUMO原核表达载体中,分别构建原核表达重组载体pET-NFC20b、pET-NFC70a,将其转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)表达系统中进行融合表达,对诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度、诱导时间和温度等诱导表达条件进行优化.采用盐酸胍稀释滴定复性方法对抗食管癌肿瘤细胞表面抗原的抗体进行复性,并用SDS-PAGE及质谱技术鉴定表达产物.结果 成功构建了重组载体pET-NFC20b、pET-NFC70a,对重组菌株pET-NFC20b、pET-NFC70a蛋白表达进行鉴定,诱导条件为0.5 mmol/L IPTG、时间3 h、温度18 °C,重组蛋白均以包涵体形式表达,经滴定复性后均获得了相对分子量为30 kD和40 kD的重组蛋白.细胞ELISA实验鉴定2种蛋白NFC20b、NFC70a能与KYSE-170、KYSE-150、SMMC7721、A549等细胞结合,具有生物学活性.结论 噬菌体抗体库中筛选得到的抗食管癌细胞的单链抗体NFC20b和NFC70a,可以成功地构建到pET28a和pET-SUMO载体内进行包涵体表达,纯化后具有蛋白活性,可为后续实验及检测试剂的研发奠定基础.

摘要： Neuritin作为神经营养因子家族成员之一,在神经系统发育和神经损伤修复方面发挥重要作用.目的:获取重组人Neuritin蛋白是深入开展其功能和机制研究的重要物质基础.有效的纯化方法是获取重组蛋白的必备条件.方法:本研究基于前期利用AKTA纯化系统获得的蛋白质的基础上,对现有的重组人Neuritin蛋白的层析纯化条件进行优化.结果:获得了纯度为92％以上的重组人Neuritin蛋白.进一步的活性鉴定结果显示,该纯化蛋白能明显促进PC12细胞突起生长;且用此纯化蛋白成功制备的抗血清,不仅能有效结合重组人Neuritin蛋白,而且可识别细胞内源性Neuritin,证实免疫动物所用的重组人Neuritin蛋白具有良好的免疫原性.结论:以上研究表明本研究中所采用的纯化方法简易有效,是蛋白制备工作中必不可少的重要环节,对于深入Neuritin的功能及机制研究具有非常重要的意义.

摘要： ① 目的 通过计算机虚拟筛选得到新型群体感应活性物质,并对其进行活性评价.② 方法 以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)群体感应系统受体蛋白LasR为研究对象,从Zinc化合物库中筛选出34个与LasR蛋白结合较好的化合物,并对其中2个化合物(A{ZINC02316089(STL038792)}、C{ZINC01130988(STK135354)})在不影响PA生长的浓度范围内,利用RT-PCR检测与QS调控相关基因的表达影响,及对PA质控菌株和临床分离株弹性蛋白酶 、生物膜形成的作用.③ 结果 虚拟筛选所得的得分较高化合物在不影响PA生长的浓度范围内,能够降低多种QS调控相关基因的表达,并能对PA弹性蛋白酶 、生物膜形成和动力作用产生影响.④ 结论 从ZINC数据库中发现了两种具有群体感应抑制活性的化合物,为进一步探索研发新型抗菌药物奠定基础.

摘要： （1）目的 通过计算机虚拟筛选得到新型群体感应活性物质,并对其进行活性评价。（2）方法以铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）群体感应系统受体蛋白LasR为研究对象,从Zinc化合物库中筛选出34个与LasR蛋白结合较好的化合物,并对其中2个化合物（A{ZINC02316089（STL038792）}、C{ZINC01130988（STK135354）}）在不影响PA生长的浓度范围内,利用RT-PCR检测与QS调控相关基因的表达影响,及对PA质控菌株和临床分离株弹性蛋白酶、生物膜形成的作用。（3）结果 虚拟筛选所得的得分较高化合物在不影响PA生长的浓度范围内,能够降低多种QS调控相关基因的表达,并能对PA弹性蛋白酶、生物膜形成和动力作用产生影响。（4）结论 从ZINC数据库中发现了两种具有群体感应抑制活性的化合物,为进一步探索研发新型抗菌药物奠定基础。

摘要： 核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary]是一种世界性植物病原真菌,主要分布于温带与亚热带地区,其寄主范围十分广泛,可寄生75科400多种植物.它引起的油菜菌核病,居我国油菜三大病害首位,每年造成的损失约占总病害损失的80％,严重制约油菜生产.

摘要： 目的：表达、纯化重组人B7-H1IgV融合蛋白,并检测其活性.rn 方法：将人B7-H1胞外片段IgV区基因插入pET22b原核表达载体,转化大肠杆菌,诱导表达,表达产物经凝胶柱纯化,复性.用纯化的rhB7-H1IgV蛋白免疫Balb/C小鼠,经ELLISA检测小鼠抗血清的活性.rn 结果：表达的rhB7-H1IgV蛋白约占菌体总蛋白的30％,得到的蛋白经HPLC检测纯度在95％以上,Western blot结果显示为目的蛋白,动物实验表明该蛋白能诱导机体产生高滴度的抗B7-H1抗体.rn 结论：已成功表达并纯化了重组人B7-H1IgV蛋白,生产工艺简单可行,纯化蛋白可诱发小鼠体内免疫应答,可进行下一步的开发和应用研究.

摘要： 经生物学软件DNAstar分析,以DTV基因组RNA为模板,经RT-PCR扩增E基因864bp的片段,将目的片段定向克隆至pET30a原核表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,阳性质粒转化BL21表达菌,经IPTG诱导获得了以包涵体形式表达的重组蛋白.将重组蛋白变性、纯化和复性后,免疫印迹检测表明重组蛋白具有良好的抗原性和特异性,为本实验室进行DTV血清学快速检测方法的建立、单克隆抗体的制备以及亚单位疫苗的研究奠定了基础.

摘要： 为了分离纯化牛白细胞中的抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)并对其体外抗菌活性进行初步分析,以中国荷斯坦奶牛血液为材料,通过离子交换层析法纯化抗菌肽,用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)进一步纯化抗菌肽,用双层琼脂糖弥散法测定其抗菌活性.结果表明,通过离子交换层析获得的阳离子峰有抗菌活性,通过RP-HPLC对阳离子峰纯化后获得了6个峰;6个峰液对大肠杆菌和沙门氏菌均具有抗菌活性,峰液F1、F2和F3对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性,仅峰液F1对白色念珠菌具有抗菌活性.

摘要： 分离纯化中国地方黑猪血液红细胞中的抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)并对其体外抗菌活性进行初步分析。以中国地方黑猪血液为材料,于4°C700×g离心15 min,弃去上层液,用灭菌生理盐水洗涤红细胞,重复3次,再用0.83％氯化铵溶液溶解红细胞(比例为3:1),然后于4°C700×g离心15 min去除白细胞,将含血红细胞裂解的溶液经冷冻干燥,冻干物即为猪红细胞抗菌肽粗提物。通过离子交换层析法纯化抗菌肽粗提物,进样速度20 mL/h,用25 mmol/L乙酸铵洗去非阳离子成分、10％乙酸洗脱阳离子成分。紫外分光光度检测器在230 nm处监测其吸光度。收集洗脱峰(5 mL/管),冻干后用0.01％乙酸重悬。再用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)进一步纯化分离有活性的阳离子峰抗菌肽,用梯度为30％～35％的乙腈和0.1％三氟乙酸进行洗脱。缓冲液A:5％乙腈,0.1％三氟乙酸;缓冲液B:95％乙腈,0.1％三氟乙酸。A到B的梯度为30％～35％,时间为80 min.用紫外分光光度计检测器在215 nm处监测其吸光度,收集峰液,冻干,用0.01％乙酸溶解。用双层琼脂糖弥散法测定其对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等受试菌株抗菌活性。结果表明,通过离子交换层析获得的阳离子峰有抗菌活性,通过RP-HPLC对阳离子峰纯化后获得了6个峰;6个峰液对大肠杆菌和沙门氏菌均具有抗菌活性,峰液F1、F2和F3对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性,仅峰液F1对白色念珠菌具有抗菌活性。本试验首次从中国地方黑猪红细胞中的分离出来具有抗菌活性的物质,为进一步研究猪红细胞源抗菌肽奠定基础。

摘要： 目的：是筛选BVDV E0蛋白相互作用的人参蛋白,探讨E0基因提高人参皂苷合成的分子机理.方法：将BVDV E0基因与pGBK-T7质粒重组构建诱饵质粒,同时构建人参酵母双杂交cDNA文库,通过酵母双杂交技术筛选与BVDV E0蛋白相互作用的人参蛋白,再通过PCR鉴定、β-半乳糖苷酶活性鉴定和回转鉴定验证蛋白的相互作用.结果：成功构建诱饵载体和人参酵母双杂交cDNA文库,并筛选得到BVDV E0蛋白相互作用人参蛋白.结论：人参cDNA文库与BVDV E0蛋白相互作用的蛋白是真核细胞翻译起始因子5A(eIF-5A).

摘要： 采用富集驯化方法从受油脂污染的土壤中分离筛选出两株高效油脂降解菌J-4和J-9,通过生理生化特性与16SrDNA同源性序列分析进行初步鉴定,鉴定结果:J-4为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginos a),J-9为变形杆菌属(proteus sp).采用单因素实验对其降解条件进行优化,结果表明:J-4在初始PH值8.0,接种量8％,初始油含量2g/L,温度25°C的条件下培养48h,油脂降解率达到76.89％;J-9在初始pH值为9.0,接种量为10％,初始油浓度2g/L,温度30°C的条件下培养48h,油脂降解率达到70.92％.

摘要： 采用富集驯化方法从受油脂污染的土壤中分离筛选出两株高效油脂降解菌J-4和J-9,通过生理生化特性与16SrDNA同源性序列分析进行初步鉴定,鉴定结果:J-4为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginos a),J-9为变形杆菌属(proteus sp).采用单因素实验对其降解条件进行优化,结果表明:J-4在初始PH值8.0,接种量8％,初始油含量2g/L,温度25°C的条件下培养48h,油脂降解率达到76.89％;J-9在初始pH值为9.0,接种量为10％,初始油浓度2g/L,温度30°C的条件下培养48h,油脂降解率达到70.92％.

摘要： 采用富集驯化方法从受油脂污染的土壤中分离筛选出两株高效油脂降解菌J-4和J-9,通过生理生化特性与16SrDNA同源性序列分析进行初步鉴定,鉴定结果:J-4为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginos a),J-9为变形杆菌属(proteus sp).采用单因素实验对其降解条件进行优化,结果表明:J-4在初始PH值8.0,接种量8％,初始油含量2g/L,温度25°C的条件下培养48h,油脂降解率达到76.89％;J-9在初始pH值为9.0,接种量为10％,初始油浓度2g/L,温度30°C的条件下培养48h,油脂降解率达到70.92％.

摘要： 采用富集驯化方法从受油脂污染的土壤中分离筛选出两株高效油脂降解菌J-4和J-9,通过生理生化特性与16SrDNA同源性序列分析进行初步鉴定,鉴定结果:J-4为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginos a),J-9为变形杆菌属(proteus sp).采用单因素实验对其降解条件进行优化,结果表明:J-4在初始PH值8.0,接种量8％,初始油含量2g/L,温度25°C的条件下培养48h,油脂降解率达到76.89％;J-9在初始pH值为9.0,接种量为10％,初始油浓度2g/L,温度30°C的条件下培养48h,油脂降解率达到70.92％.

摘要： 本发明涉及一种快速鉴定高亲和力TCR抗原交叉反应活性的方法，将TCR和pMHC序列调整为组成型启动子诱导表达，并将该元件整合表达到酵母基因组中，包括以下步骤：将TCR和pMHC蛋白展示到不同交配型酵母表面；利用整合TCR和pMHC的不同交配型酵母进行酵母交配实验；二倍体的筛选和二代测序。本发明能够提供一种快速鉴定高亲和力TCR抗原交叉反应活性的方法，无需纯蛋白，仅需合成DNA序列，利用Golden‑gate克隆方法，一周内可获得更全的抗原突变文库，方便快捷；借助酵母交配系统，突破在细胞水平上筛选的限制，操作步骤简化，可短时间内获得与特定TCR相互作用的抗原序列，实验结果可靠。

摘要： 本申请涉及一种白鲜地上部分挥发油成分分析及其抑菌活性研究。白鲜是我国野生栽培的一种经济实用植物，干燥的根皮通常被称为白鲜皮，用于治疗各种炎症性疾病，为了提高白鲜整株植物的利用率，对白鲜被废弃的地上部分进行开发。采用水蒸气蒸馏法得到白鲜地上部分的挥发油，收率为0.14%，采用GC‑MS法鉴定含有39种化合物，占总成分的94.3%。主要成分包括大根香叶烯D（18.04%）、异松油烯（12.97%）、罗勒烯(10.42%)、β‑石竹烯（7.74%）、植醇（5.20%）和绿花白千层醇（3.16%），占总成分含量的57.5%。白鲜地上部分挥发油对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌均有抑菌作用，其中对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌MIC分别为1.56 mg/mL和3.23 mg/mL，为白鲜地上部分的开发提供科学依据。

摘要： 本发明公开了一种碱活性骨料快速鉴定方法，将骨料样品粉磨制成细度小于10%的粉体样品，按照GB/T23439‑2017《混凝土膨胀剂》附录C规定的试验方法，将占水泥质量5%、10%、15%、20%的粉体样品分别掺入标准规定的水泥净浆中，通过外加浓度为10%的NaOH溶液，使试验所用水泥碱含量达到3.5%，再将搅拌好的水泥净浆分别装入4个不同的玻璃啤酒瓶中，装好后置于室温环境中即可，然后观察玻璃啤酒瓶在30天内是否出现裂缝，若在规定的龄期内玻璃啤酒瓶出现裂缝，则判定骨料具有碱活性，否则，判定骨料不具有碱活性。本发明可以大幅度缩短骨料碱活性的鉴定周期、简化骨料碱活性的鉴定程序和降低建设工程检测费用。

摘要： 本发明公开了一种快速鉴定Tn5转座酶活性的方法，其步骤为：（1）构建报告基因表达质粒以及Tn5转座酶表达质粒，所述报告基因表达质粒为荧光蛋白表达质粒，报告基因表达质粒复制子为与pBR322复制子兼容的大肠杆菌复制子，报告基因表达质粒的启动子为可诱导型启动子，在启动子两侧加装有被Tn5转座酶特异性识别的序列;（2）报告基因表达质粒和Tn5转座酶表达质粒共转化到表达细胞中；（3）诱导Tn5转座酶表达；（4）诱导报告基因表达；（5）检测报告基因表达水平，确定转座酶的相对活性。本发明通过检测荧光强度可迅速、灵敏地测试Tn5转座酶活性。整个活性测定过程仅需30‑60min，极大地缩短了酶活测定时间并大幅提高了测试通量。

摘要： 本发明涉及昆虫性信息素成分鉴定及合成技术领域，提供了一种杨小舟蛾性信息素活性成分及其制备和鉴定方法。本发明首次明确了杨小舟蛾性信息素活性成分的结构为顺,反‑13,15‑十八碳二烯醛，该活性成分可引起杨小舟蛾雄蛾显著的电生理反应，为林间杨小舟蛾测报和诱捕奠定理论基础。本发明通过Wittig‑Schlosse反应及硼氢化‑还原的方法合成杨小舟蛾性信息素活性成分，该合成方法具有产率高、纯度高、立体选择性强，结果重现性高等优点。本发明采用气相色谱‑触角电位技术，通过合成的标准物质和杨小舟蛾性信息素腺体提取物对比分析的方法确定杨小舟蛾性信息素活性成分，该鉴定方法周期短、结果可信度高。

摘要： 本发明公开了分离鉴定植物乳杆菌源抑制双菌生物膜的活性物质的方法，属于微生物技术领域。本发明方法首先利用乙酸乙酯对植物乳杆菌发酵液中的活性成分进行了有效的萃取，然后通过LC‑MS先检测了萃取物，以便对萃取物中的成分有全面了解，然后，利用硅胶柱层析对乙酸乙酯萃取物做进一步的分离，筛选得到有显著抑制效果的组分，并对该组分分别做了衍生化和不衍生化处理，再通过GC‑MS检测，且采用分段升温，可以使小分子成分得到有效分离。本发明能够全面、准确地测定植物乳杆菌发酵液有效部位中的小分子化合物的成分及含量。

摘要： 本发明公开了基于基因蛋白活性的小分子抗肿瘤效果鉴定方法及系统。方法包括：基于肿瘤细胞的基因表达数据，获取关键节点基因和从属基因，关键节点基因与多个从属基因存在相关关系，从属基因用于反映关键节点基因的蛋白活性；计算关键节点基因在小分子干扰前后的蛋白活性，获得对应小分子干扰前的蛋白活性的关键节点基因的蛋白活性静态图谱和小分子干扰后的蛋白活性的关键节点基因的蛋白活性变化图谱；比较变化图谱和静态图谱，基于Fisher精确性检验和多重检验校正确定小分子是否可以逆转肿瘤细胞的生理状态，并判断小分子对静态图谱的逆转效果及小分子的抗肿瘤效果，提高了推断小分子抗肿瘤效果的准确性与敏感性。

摘要： 本发明公开了一种快速鉴定Tn5转座酶活性的方法，其步骤为：（1）构建报告基因表达质粒以及Tn5转座酶表达质粒，所述报告基因表达质粒为荧光蛋白表达质粒，报告基因表达质粒复制子为与pBR322复制子兼容的大肠杆菌复制子，报告基因表达质粒的启动子为可诱导型启动子，在启动子两侧加装有被Tn5转座酶特异性识别的序列;（2）报告基因表达质粒和Tn5转座酶表达质粒共转化到表达细胞中；（3）诱导Tn5转座酶表达；（4）诱导报告基因表达；（5）检测报告基因表达水平，确定转座酶的相对活性。本发明通过检测荧光强度可迅速、灵敏地测试Tn5转座酶活性。整个活性测定过程仅需30‑60min，极大地缩短了酶活测定时间并大幅提高了测试通量。

摘要： 本发明提供一种背负式花粉活性鉴定装置，属于农业检测技术领域。装置包括防护挡板、操作平台、载玻组件及显微组件，防护挡板能够被穿戴在使用者的胸前，操作平台设置在防护挡板的前方，载玻组件设置在操作平台上，包括载玻平台，载玻平台能够在前后方向和/或左右方向发生位移。显微组件设置在防护挡板上，且能够左右转动，显微组件包括物镜，物镜的观察视野能够在显微组件转动的过程中，位于载玻平台上方。观察花粉活性时，将制作好的载玻片放置于载玻平台上，将显微组件旋转至物镜位于操作平台上方，使用者微微低头，即可完成显微观察，结构简单，使用方便，实时对采集的花粉进行活性鉴定，避免花粉长时间低温储存，降低系统误差。

摘要： 本公开提供了一种活细胞内增强子活性鉴定方法与装置，用于实现活细胞内增强子活性的灵敏检测。本公开中采用纳米电穿孔生物芯片对细胞质膜进行高度聚焦穿孔，并提供驱动力，加速增强子探针向细胞核的递送。增强子探针采用循环扩增策略设计，在1小时内将荧光信号提高100倍以上。在实施例中，该方法与装置成功实现活细胞内CCAT1增强子的活性检测，同时细胞活性不受影响，证实了本公开中提出的方法及装置在检测活细胞中增强子活性方面的稳健性和可靠性。本公开为活细胞内增强子基因调控机制研究与临床应用诊断提供了便利的通用平台。