小鼠耳蜗组织NT3基因的克隆及其原核表达鉴定

摘要

目的　克隆小鼠耳蜗组织中重要神经营养因子 NT3的基因 ,并对其进行原核表达鉴定 ,为进一步研究该基因对内耳听觉功能的影响以及对耳聋的基因治疗提供基础 .方法　根据所设计的引物用 RT- PCR方法扩增目的基因 ,克隆入p U C19载体 ,行酶切鉴定和测序 ;然后进一步克隆入原核表达载体 p DH,温度诱导表达 ,SDS- PAGE检测表达产物 .结果　 RT- PCR得到长度为 777bp的基因片段 ,克隆后酶切鉴定正确 ,测序结果经 BL AST对比 ,与 Gen Bank中小鼠 NT- 3序列完全一致 .成功构建了原核表达载体 ,经温度诱导表达出NT3蛋白 .结论　从耳蜗组织中能获得正确的 NT3基因克隆以及稳定的原核表达 。