猪细小病毒LXB-PPV-20-06株NS1基因的原核表达及免疫活性的鉴定

摘要

利用PCR技术扩增PPV LXB-PPV-20-06株NS1基因全序列，将目的基因与原核表达载体pET-32a(+)进行连接并转化，重组质粒经PCR和双酶切鉴定并测序。测序结果表明，目的基因正确地插入到重组质粒当中。通过对表达宿主菌的选择，PPV LXB-PPV-20-06株NS1基因在Rosetta(DE)plysS菌中的到良好的表达，并确定了NS1基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为0.6mmol/L、诱导时间为3.5h、诱导温度为37℃。表达产物经SDS-PAGE分析，得到分子量约为97ku的重组蛋白，除了包涵体形式表达外，一部分重组蛋白以可溶性形式表达。重组蛋白经Western blot检测，可与PPV阳性血清反应。这为NS1蛋白在临床诊断中的应用打下基础。