蜂毒素基因重组腺病毒抗肝癌作用的实验研究

摘要

目的将编码蜂毒素的基因用于肝癌治疗,为蜂毒素的临床应用提供实验依据.方法采用细菌内同源重组法构建携蜂毒素基因及甲胎蛋白(AFP)启动子的重组腺病毒,X-gal染色检测其转染效率,MTT法测定其对肝癌细胞的抑制作用,并观察其体外转染对肝癌细胞致瘤能力的影响及肿瘤内注射对荷肝癌裸鼠的抑瘤效果.结果蜂毒素基因mRNA在细胞中得到了转录;当感染复数(MOI)为10时,重组腺病毒在体外对BEL-7402人肝癌细胞的转染效率达到100%,体内转染亦有较高的效率.Ad-rAFP-Mel和Ad-rAFP对BEL7402细胞的抑制率分别为66.2%±2.7%和2.9%± 2.3%(t=30.83,P<0.01).Ad-CMV Mel对BEL7402、SMMC7721及L02细胞的抑制率分别为58.9%± 9.6%、65.9%±3.8%和31.7%± 1.2%,而Ad-rAFP-Mel对BEL7402、SMMC7721及L02细胞的抑制率分别为66.2%±2.7%、16.1%±6.6%和7.5%±3.3%,与Ad-CMV-Mel组比较t=1.27,P=0.27,t=11.31、P<0.01和t=12.12、P<0.01.重组腺病毒体外转染后,肝癌细胞致瘤能力减弱,肿瘤内注射,裸鼠皮下移植瘤消退. 结论蜂毒素基因重组腺病毒在体内外对肝癌均有特异性抑制作用,证明动物毒素基因作为抗肿瘤目的基因具有可行性.