反向杂交法检测乙型肝炎病毒3种核苷（酸）类似物耐药突变

摘要

目的建立一种同时检测HBV 3种核苷（酸）类似物耐药突变的方法。方法以基因库公布的981条HBV基因序列为基础,设计2对地高辛标记的通用引物,扩增HBV聚合酶的逆转录区。针对拉米夫定、阿德福韦和恩替卡韦10个耐药位点上的氨基酸替换形式,设计26条特异性寡核苷酸探针,包括I169T,V173L/G,L180M,A181T/V,T184G,S202I/G,M204V/I,Q215S,N236T,M250V/I/L,并固定于带正电荷的尼龙膜上。利用地高辛标记的靶DNA扩增产物与固定于膜上的特异性探针的反向杂交,检测HBV 3种核苷（酸）类似物的耐药突变。应用反向杂交法分别检测HBV野生和耐药标准株,以及40例患者血清标本,观察其检测特异性和准确性。结果反向杂交法检测HBV野生和耐药标准株,有效地区分了I169T,V173L,L180M,A181T,T184G,S202I,M204V,Q215S,N236T,M250V 10个耐药位点上的特异性探针。40例患者血清标本中,37例临床病例的耐药检测结果与直接测序法一致。结论反向杂交法可以快速,准确的检测出HBV3种核苷类似物耐药突变,有助于这3种药物耐药的诊断和个体化治疗。