小檗碱联合硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞株U266细胞作用机制的体外研究

摘要

目的探讨小檗碱与硼替佐米联合对多发性骨髓瘤（MM）细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用及其可能的机制。方法以MM细胞株U266细胞为研究对象,以小檗碱和硼替佐米作用后,采用MTT法检测其对U266细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测其对U266细胞凋亡的影响,采用ELISA法检测其对细胞caspase-3、-8、-9表达的影响,采用Westernblot法检测其对细胞Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）、TNF受体相关死亡域蛋白（TRADD）表达的影响。采用金（正均）氏公式计算协同系数Q值分析两药的协同作用。结果①两药单独作用时对U266细胞增殖的抑制作用均呈时间、剂量依赖关系;小檗碱（20μmol/L）与硼替佐米（5 nmol/L）联合作用对U266细胞增殖具有协同抑制作用（Q值为1.31~1.65）。②无论单独用药还是联合用药,与对照组比较,用药组早期凋亡细胞的比例均显著增加（P值均＜0.05）;两药联合对U266细胞具有协同促进凋亡的作用（作用6、12 h,Q值分别为0.896和1.197）。③两药联合应用后U266细胞caspase-3、-8、-9、表达水平均较对照组、单药组明显增加,差异有统计学意义（P值均＜0.05）。④两药联合应用（24、48h）后U266细胞TRADD（0.91±0.01、0.70±0.01）、FADD（0.98±0.01、0.98±0.01）蛋白水平均较对照组（0.54±0.01、0.41±0.01）明显增加,差异有统计学意义（P值均＜0.05）。结论小檗碱联合硼替佐米可协同促进MM细胞凋亡,这种作用可能是通过上调TRADD及FADD蛋白表达水平而实现的。