猪苓多糖联合硼替佐米促进多发性骨髓瘤U266细胞的凋亡和自噬

摘要

目的 研究猪苓多糖(PPS)联合硼替佐米(BTZ)对人多发性骨髓瘤U266细胞的影响.方法 ①PPS 12.5～400μmol·L-1或BTZ 10～80 nmo·L-1处理U266细胞48 h,PPS 50μmol·L-1+BTZ 10～80 nmol·L-1处理U266细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率.PPS 12.5～50μmo·L-1+BTZ 10～80 nmol·L-1处理U266细胞48 h,Calcusyn软件分析计算联合用药指数(CI),并确定联合用药的浓度.②U266细胞分为细胞对照组、PPS 20μmol·L-1组、BTZ 25 nmol·L-1组和PPS 20μmol·L-1+BTZ 25 nmol·L-1组,孵育48 h.流式细胞术检测细胞凋亡率,Western印迹法检测细胞Bax、Bcl-2、活化胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶3、自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链(LC)3B和P62蛋白、蛋白激酶B(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)磷酸化水平表达的变化.结果 ①PPS 12.5～400μmol·L-1浓度范围内可显著抑制U266细胞存活(P<0.01).BTZ 10～80 nmol·L-1浓度范围内可显著抑制U266细胞存活(P<0.01).与PPS 50μmol·L-1单独用药相比,PPS 50μmol·L-1+BTZ 10～80 nmol·L-1组可显著抑制U266细胞存活(P<0.01).PPS 12.5～50μmol·L-1+BTZ10～80 nmol·L-1各浓度组合的CI均小于1,表明PPS联合BTZ用药具有协同增效作用,并确定联合用药浓度为PPS 20μmol·L-1和BTZ 25 nmol·L-1.②与PPS和BTZ组相比,PPS+BTZ组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01);Bax/Bcl-2比值和活化胱天蛋白酶3/胱天蛋白酶3比值显著增加(P<0.01),P62蛋白表达显著降低(P<0.05),LC3BⅡ/Ⅰ比值显著升高(P<0.01),Akt和mTOR磷酸化水平显著降低(P<0.01).结论 PPS联合BTZ可通过抑制Akt/mTOR通路,协同诱导多发性骨髓瘤细胞U266的凋亡和自噬.