抗氧化酶抑制剂对人肝L02细胞自噬的影响

摘要

目的 通过观察抗氧化酶抑制剂对人肝L02细胞内氧化还原体系的干涉作用,探究超氧阴离子(O2^-)、过氧化氢(H 2O 2)和羟自由基(OH·)对细胞自噬发生的影响。 方法 体外培养L02细胞,分别或联合给予超氧化物歧化酶(SOD)抑制剂二乙基二硫代氨基甲酸(DETC)、过氧化氢酶(CAT)抑制剂氨基三唑(ATZ)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)抑制剂青霉胺(PEN),培养12 h。采用试剂盒检测细胞内SOD、CAT和GPx的酶活力,O2^-和OH·的产生能力,H 2O 2和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞相对活性;采用免疫印迹技术检测自噬标志蛋白表达变化,包括微管相关 蛋白1轻链(LC)3、自噬启动蛋白Beclin-1和自噬特异性底物P62;Pearson法分析各项检测指标的相关性。 结果 在抗氧化酶抑制剂的干预下,L02细胞内各种抗氧化酶活力均对应性下降,细胞内H 2O 2和GSH含量、产生O2^-和OH·能力的变化与相应的抗氧化酶活力相关,自噬标志蛋白LC3、Beclin-1和P62的表达量与细胞产生O2^-的能力相关(均 P <0.05)。 结论 细胞内氧化还原系统中O2^-可能是促进细胞自噬发生的关键分子,而H 2O 2及其进一步产生的OH·与细胞自噬发生的关系密切。