硝普钠对体外培养的海马神经元NF-κB和caspase-3基因表达的影响

摘要

目的 探讨NO供体硝普钠(SNP)诱导体外培养的海马神经元凋亡与核因子-kappaB(NF)-κB p65和caspase-3表达变化的关系.方法 终浓度分别为0、25、50、100、200、400 μmol/L的SNP处理海马神经元24 h,用MTT比色法分析细胞存活率;Hcechst3258荧光染色观察凋亡的形态学改变;DNA琼脂糖凝胶分析凋亡的生化特征;用RT-PCR检测NF-κB p65、caspase-3mRNA表达变化;Westem印迹检测NF-κB p65、caspase-3蛋白表达的变化.结果 SNP可剂量依赖性的降低神经元的存活率;荧光显微镜可见染为高亮蓝色的典型凋亡小体,其细胞核明显固缩、凝聚和断裂;电泳图谱显示清晰的DNA梯度.随着SNP剂量的增加,NF-KB p65 mRNA、NF-κB p65蛋白表达逐渐增加;caspase-3 mRNA表达无改变,但caspase-3酶原被裂解活化;从50μmol/L SNP起,caspase-3相对酶活性显著增加,为对照组的3.02倍,100μmol/L达最大值.结论 SNP可诱导培养的海马神经元凋亡,其凋亡机制可能与增加NF-κB p65表达及激活caspase-3酶原有关.