hIFN-β基因重组腺病毒载体的构建

摘要

目的构建hIFN-β基因的腺病毒载体,为探索hIFN-β在肿瘤基因治疗中的作用作准备.方法从健康人外周血中提取出基因组DNA,pyrobest Taq酶PCR法扩增出hIFN-β基因片段.将目的基因克隆入中间载体pMD-18T载体,经蓝白筛选和PCR筛选后测序证实序列无误.酶切目的基因并将之克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV中,将新形成的pAdTrack-CMV-hIFN-β用限制性内切酶Pme Ⅰ线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌株BJ5183细胞中.卡那霉素及酶切筛选出重组子pAd-hIFN-β,内切酶pacⅠ再次将重组子线性化,脂质体转染细胞株HEK293.借助GFP的表达可以在转染的2～3天观察到包装病毒Ad-hIFN-β产生,7～10天出现病毒斑.结果经PCR法及酶切证实各中间过程载体,且最终的包装病毒中携带有目的基因hIFN-β.结论大肠杆菌内同源重组法能有效和较为方便的构建出含有目的基因的腺病毒载体Ad-hIFN-β,重组子能够在HEK293细胞中扩增,病毒包装的成功为进一步研究hIFN-β基因治疗肿瘤提供了一个良好的转导载体