正交设计在实时定量PCR检测条件优化中的应用

摘要

目的 探索正交设计在实时定量PCR检测条件优化中的应用,找出扩增ICAM-1基因的最佳条件.方法 建立大鼠皮肤损伤模型,采用正交设计实时定量PCR的各影响条件,提取损伤处皮肤组织总RNA反转录成cDNA,cDNA作为模板,通过特异性引物扩增ICAM-1基因.对扩增曲线和融解曲线制定评分标准,量化不同实验条件下的扩增结果并进行统计分析.结果 退火温度、模板量和引物浓度直接影响扩增效果,但三因素间无相互作用.结果 经统计学分析表明退火温度61℃、模板cDNA用量0.4μg和引物终浓度150μmol/L为实时定量PCR检测ICAM-1基因的最佳条件组合.结论 正交设计是一种切实可行、快速经济的实时定量PCR检测条件优化方法.