微小RNA-203对食管癌化疗敏感性的影响及其机制

摘要

目的探讨微小RNA（miR）-203对食管癌化疗敏感性的影响及其机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析顺铂（DDP）耐药食管癌细胞株TE-8/DDP和亲本细胞株TE-8细胞中miR-203表达水平。将TE-8/DDP细胞株分为对照组和miR-203组, 采用慢病毒感染建立对照和miR-203过表达细胞系。细胞计数试剂盒（CCK-8）分析对照组和miR-203组细胞对DDP的敏感性;流式细胞术分析两组细胞凋亡水平;生物信息学和双荧光素酶实验分析miR-203靶基因。蛋白质免疫印迹分析miR-203靶蛋白表达水平。计量资料比较采用t检验。结果亲本细胞株TE-8细胞miR-203表达水平（1.31±0.15）明显高于DDP耐药食管癌细胞株TE-8/DDP中miR-203表达水平（0.53±0.18）, 差异有统计学意义（t=4.801, P＆0.05）。对照组细胞经50 μg/ml和100 μg/ml DDP处理36 h后细胞吸光度值（1.98±0.13、1.43±0.12）明显高于miR-203组细胞吸光度值（1.58±0.11、1.11±0.12）, 差异有统计学意义（t=3.781、3.017, P＆0.05）。对照组细胞经50 μg/ml和100 μg/ml DDP处理36 h后细胞凋亡率[（30.54±5.81）%、（51.45±6.29）%]明显低于miR-203组细胞吸光度值[（49.29±5.00）%、（78.27±8.81）%], 差异有统计学意义（t=3.781、3.017, P＆0.05）。100 mg/kg DDP治疗20 d后, 对照组细胞形成肿瘤体积[（498.35±43.10） mm3]明显大于miR-203组细胞体内肿瘤体积[（309.44±27.87） mm3], 差异有统计学意义（t=5.091, P＆0.05）。对照组细胞形成肿瘤质量[（8.91±1.29） g]明显高于miR-203组细胞体内肿瘤质量[（4.73±1.01） g], 差异有统计学意义（t=3.182, P＆0.05）。生物信息学和双荧光素酶结果显示三磷酸腺苷结合盒转运子E1（ABCE1）是miR-203的靶基因。对照组细胞ABCE1表达水平（0.89±0.09）明显高于miR-203组细胞ABCE1表达水平（0.25±0.07）, 差异有统计学意义（t=4.761, P＆0.05）。对照组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达水平（0.38±0.09）明显高于miR-203组细胞Caspase-3表达水平（1.21±0.13）, 差异有统计学意义（t=6.281, P＆0.05）。结论 miR-203通过靶向ABCE1蛋白调控食管癌对顺铂的耐药性。