微小RNA-99a对食管癌细胞生物学行为和顺铂敏感性的影响

摘要

目的 探讨微小RNA-99a(miR-99a)对食管癌细胞生物学行为和顺铂敏感性的影响.方法 实时定量PCR(qPCR)检测食管癌细胞EC109及其顺铂(CDDP)耐药细胞株EC109/CDDP的miR-99a水平.实验分为两部分:第一部分的EC109/CDDP细胞经脂质体转染miR-99a模拟物(mimics)或阴性对照(NC),经不同浓度CDDP(0～30 mg/L)处理后用CCK-8法测定细胞活力以计算半数抑制浓度(IC50).第二部分EC109/CDDP细胞根据处理情况分为4组:空白对照组(仅脂质体处理)、CDDP组(脂质体联合CDDP处理)、NC组(脂质体转染NC联合CDDP处理)和过表达组(脂质体转染mimics联合CDDP处理),CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室实验和划痕实验评估细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力,qPCR与Western blotting检测Bcl-2、caspase-3和p-Akt的表达情况.结果 EC109/CDDP细胞的miR-99a水平较EC109细胞下调(0.408±0.051 vs.1.023±0.074,P<0.01).第一部分中转染mimics的EC109/CDDP细胞较转染NC的增殖抑制率升高(P<0.05),且CDDP的IC50由未转染细胞的(18.972±1.653)mg/L和转染NC细胞的(19.294±1.810)mg/L降至转染mimics细胞的(11.062±1.417)mg/L(P<0.05).第二部分中,与其余3组相比,过表达组转染后的细胞活力降低,凋亡率升高且划痕愈合率和穿膜细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05).过表达组的caspase-3水平升高,而Bcl-2和p-Akt水平降低,且与其余3组的差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-99a可能通过调控Akt信号通路活性,抑制EC109/CDDP细胞的增殖、侵袭和迁移能力并诱导细胞凋亡,进而提高耐药细胞对CDDP的敏感性,该因子可能为食管癌的化疗耐药提供了一种新解释.