mTOR短发卡RNA靶向调控血管内皮细胞自噬在激素性股骨头坏死中作用机制

摘要

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路介导的血管内皮细胞（VEC）自噬及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白短发卡RNA（mTOR-shRNA）靶向调控在激素性股骨头坏死中作用。方法 2019年3月至7月,从SD大鼠股骨头中分离培养血管内皮细胞分为3组,即空白对照组（Ctrl）,甲基强的松龙组（MP）及甲基强的松龙联合mTOR-shRNA腺病毒转染组（MP+shmTOR）。分别对各组自噬体、血管内皮细胞损伤情况进行观察,并对各组自噬相关基因以及PI3K/Akt/mTOR的mRNA和蛋白表达进行测定;多组间比较采用单因素方差分析,多个样本均数两两比较采用LSD检验。结果甲基强的松龙抑制了VEC中自噬关键基因的表达,但诱导mTOR、PI3K、Akt基因高表达。MP组中PI3K、Akt、mTOR的mRNA与蛋白表达明显高于Ctrl组,MP+shmTOR组介于两组之间;而Beclin1、MAP1 LC3的mRNA与蛋白表达明显低于Ctrl组,MP+shmTOR组介于两组之间（平均灰度值3 837.9比2 996.3比3 005.6,F=428.640,P＆0.01）;甲基强的松龙经PI3K/Akt/mTOR对VEC的自噬进行抑制,mTOR-shRNA转染可以部分修复甲基强的松龙导致的VEC损伤。Ctrl组中6-keto-PGF1α的含量稳定,在4个检测点含量无改变;MP组6-keto-PGF1α的含量在4个检测点逐渐增加;MP+shmTOR组6-keto-PGF1α的含量在4个检测点均高于Ctrl组,低于MP组（平均吸光光度值104.98比206.83比145.91,F=352.830,P＆0.01）。结论甲基强的松龙诱导的VEC损伤为PI3K/Akt/mTOR信号通路介导的自噬异常,mTOR-shRNA可部分阻断该病理过程从而促进VEC修复。