胆囊癌细胞株GBC-SD类肿瘤干细胞筛选的研究

摘要

目的筛选胆囊癌GBC-SD系中具有干细胞特性的细胞克隆。方法在肿瘤干细胞培养基加入不同剂量的顺铂悬浮培养GBC-SD,将悬浮细胞收集后注射裸鼠,并持续瘤内注射顺铂,成瘤后取瘤内细胞继续原培养基培养,获得悬浮生长的克隆,分别测定其干细胞标志物（CD133、CD44、CD24）、耐药基因ABCG2细胞株MDR-1和转录因子OCT-4、Nanog的表达。结果在肿瘤干细胞培养基和顺铂的筛选压力下,GBC-SD细胞能有效形成悬浮生长的克隆球,流式检测结果表明克隆球高表达CD133+（97.6%）、CD44+（77.9%）,低表达CD24+（2.3%）,同时表达耐药基因ABCG2和MDR-1,定量聚合酶链反应（PCR）及免疫荧光方法检测发现,与普通胆囊癌细胞株GBC-SD比较,克隆球干细胞基因OCT-4、Nanog表达分别增强266、284倍。结论顺铂结合无血清培养基悬浮培养法筛选GBC-SD,作为一种新的干细胞分选方法,可以分离出具有肿瘤干细胞特征的胆囊癌克隆球。