上调转录因子Sp1对胃癌细胞MKN-45增殖的影响

摘要

目的构建pEGFP-Sp1真核表达载体,转染Sp1低表达胃癌细胞株MKN-45,观察转染后细胞内Sp1表达及其体外增殖能力。方法 PCR扩增Sp1（2337 bp）全长序列,连接至pEGFP-N1质粒（4700 bp）,测序鉴定无误后,以Lipofectamine 2000转染胃癌细胞株MKN-45。细胞免疫组织化学染色定位Sp1表达部位,PCR扩增及Western blot检测细胞Sp1表达。CCK-8法检测细胞体外增殖能力。结果构建pEGFP-Sp1表达质粒并转染胃癌细胞株,外源性Sp1定位于MKN-45细胞核中并稳定表达。体外培养3 d后,MKN-45-Sp1增殖能力明显高于MKN-45-N1及MKN-45细胞（MKN-45-Sp1比MKN-45-N1及MKN-45,P＜0.05）。结论构建pEGFP-Sp1真核表达载体,稳定上调胃癌细胞株MKN-45中Sp1表达,转染后胃癌细胞株体外增殖能力明显增高。