RNAi沉默RhoC基因对人脐静脉内皮细胞体外生物学行为的影响

摘要

目的观察RNA干扰（RNAi）沉默RhoC基因表达对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）生物学行为的影响。方法构建RhoC基因特异性短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体,以脂质体介导转染HUVEC,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法检测RNAi后细胞中RhoCmRNA及蛋白表达水平变化;划痕试验检测细胞迁移能力,噻唑蓝（MTT）比色法测定转染前后细胞增殖及黏附能力的变化。胶原基质胶三维培养检测内皮细胞体外血管生成能力。结果转染RhoCshRNA的实验组与空载体对照组比较,RhoC mRNA的表达分别为（10.93±4.72）%和（56.77±13.79）%,蛋白质的表达分别为（19.95±7.31）%和（62.06±22.75）%,细胞愈合百分比分别为（45.08±12.93）%和（73.49±10.83）%,增殖能力[吸光度（A）值]分别为1.002±0.283和1.629±0.192,血管样结构分别为2.85±1.08和4.46±1.38,而黏附能力（A值）分别为0.795±0.097和0.907±0.178。实验组较对照组迁移能力、增殖能力和血管样结构生成能力显著降低（P＜0.05）,转染后细胞的体外黏附能力无明显变化（P＞0.05）。结论抑制RhoC表达能降低HUVEC体外增殖、迁移及血管生成能力。