DNMT1和DNMT3b基因干扰对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的观察DNA甲基转移酶1（DNMT1）和DNA甲基转移酶3b（DNMT3b）基因干扰对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法利用LipofectamineTM2000转染DNMT1和DNMT3b小分子干扰RNA（siRNA）至胰腺癌BxPC-3细胞。实验共分5组:DNMT1干扰组（转染DNMT1-siRNA）、DNMT3b干扰组（转染DNMT3b-siRNA）、双重干扰组（转染DNMT1+DNMT3b-siRNA）、阴性对照组（转染negative-siRNA）和空白对照组（转染脂质体）。转染48h后,应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法和Western blot法分别检测细胞中DNMT1、DNMT3b mRNA和蛋白的表达水平;噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞体外增殖活力;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白对照组和阴性对照组比较,各干扰组的DNMT1和（或）DNMT3b mRNA及蛋白表达量均显著降低（P＜0.01）。DNMT1干扰组和双重干扰组的细胞生长抑制率分别为30.9%和28.3%,均显著高于DNMT3b干扰组的14.5%（P＜0.01）,而DNMT1干扰组和双重干扰组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。空白对照组、阴性对照组、DNMT1干扰组、DNMT3b干扰组和双重干扰组的细胞凋亡率分别为3.74%、5.07%、44.46%、24.20%和39.24%,各干扰组的细胞凋亡率均比对照组显著增加（P＜0.01）,DNMT1干扰组与双重干扰组的细胞凋亡率均显著高于DNMT3b干扰组（P＜0.01）,而DNMT1干扰组与双重干扰组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 DNMT1和（或）DNMT3b基因表达下调后,能抑制胰腺癌BxPC-3细胞生长,并能诱导细胞凋亡。DNMT1单干扰的抑癌作用优于DNMT3b单干扰,DNMT1和DNMT3b双重干扰无明显的协同效应。