RNA干扰沉默食管癌细胞株ECA109中人乳头瘤病毒18型E6、E7基因对人类白细胞抗原Ⅱ类分子表达的影响

摘要

目的应用RNA干扰（RNAi）技术,使人乳头瘤病毒18型（HPV18）E6、E7基因表达下调或缺失,观察下调或缺失后的HPV18阳性食管癌细胞株ECA109细胞内的人类白细胞抗原（HLA）-Ⅱ类分子表达。方法 .将合成并包装好的含有E6、E7基因片段的短发卡RNA（shRNA）腺病毒载体（shpAd-E6-eGFP、shpAd-E7-eGFP）感染食管癌细胞株,并用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）[E6 siRNA组HLA-ⅡmRNA表达量是空白组的1.27倍,E7 siRNA组HLA-ⅡmRNA表达量是空白组的1.66倍(P＞0.05]和Western blot技术[各组ACTIN蛋白条带灰度基本一致,shRNA-E6、shRNA-E7、无关序列和阴性对照组蛋白表达分别为0.5543、0.7246、0.4452、0.4365,siRNA E6、E7实验组灰度稍高于空白组（P＞0.05）及无关序列组]以β-actin为内参照,在基因和蛋白水平上检测E6、E7和胞内HLA-Ⅱ类分子的表达。结果 2条含有E6、E7基因片段的shRNA腺病毒载体（shpAd-E6-eGFP、shpAd-E7-eGFP）能有效的抑制ECA109细胞中HPV18 E6、E7的转录及表达,抑制率分别为92%和89%,细胞内HLA-Ⅱ类分子的表达上调,分别是空转染组及无关序列组的1.27和1.66倍,无关序列组和空白对照组HPV18 E6、E7及HLA-Ⅱ的mRNA和蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 HLA-Ⅱ类抗原表达的缺失可能与食管癌中的HPV感染及作用明显相关。