槲皮素通过整合素信号通路调控视网膜脉络膜新生血管生成的机制研究

摘要

目的探讨槲皮素体外、体内抑制视网膜新生血管及脉络膜新生血管（CNV）生成及发展的作用机制。方法体外研究采用人脐静脉内皮细胞（HUVECs），体内研究采用氧诱导视网膜病变（OIR）动物模型及激光诱导的CNV动物模型。细胞学研究中分为正常对照组、血管内皮生长因子165（VEGF-165）处理组和VEGF-165＋槲皮素处理组。利用细胞计数试剂盒8（CCK8）及Transwell法检测HUVECs的增生及迁移能力，采用Western blot法检测整合素α5及整合素β3蛋白的表达。体内研究中利用OIR动物模型及激光诱导的CNV动物模型评估腹腔内注射槲皮素在抑制视网膜新生血管及CNV中的效果，C57乳母鼠和6～8周龄C57小鼠各18只，均采用随机数字表法随机分为正常对照组、模型对照组和槲皮素处理组，每组6只，采用Western blot法检测各组视网膜中整合素α5和整合素β3蛋白的表达。结果在体外研究中，20 ng/ml VEGF-165可以促进HUVECs的增生及迁移，而50 μmol/L槲皮素可以抑制HUVECs的增生及迁移，正常对照组、VEGF-165处理组以及VEGF-165＋槲皮素处理组细胞增生值和穿过Boyden小室的细胞数量整体比较，差异均有统计学意义（F分组＝18.51，P＝0.00；F＝85.74，P＝0.00）。在体内研究中，槲皮素连续腹腔内注射20 mg/（kg·d）可以减少OIR模型视网膜无血管灌注区面积，并减少激光诱导的CNV面积，与模型对照组相比，差异均有统计学意义（t＝6.02，P＝0.00；t＝5.79，P＝0.00）。Western blot检测显示，VEGF-165＋槲皮素处理24 h组整合素α5和整合素β3蛋白表达量均较VEGF-165处理组明显降低，差异均有统计学意义（t＝4.46，P〈0.05；t＝5.18，P〈0.01）。VEGF-165＋槲皮素处理48 h组整合素α5和整合素β3蛋白的表达量较VEGF-165＋槲皮素处理24 h组有所升高，但与VEGF-165处理组相比仍降低，差异均有统计学意义（t＝6.54，P〈0.05；t＝7.17，P〈0.01）。在OIR及CNV模型中，槲皮素可以抑制模型对照组中整合素α5及整合素β3的表达，差异均有统计学意义（t＝5.44、13.52，均P＝0.00）。结论槲皮素可以通过调控整合素抑制视网膜新生血管的形成，为新生血管的治疗提供新的途径。