槲皮素对高压氧诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用

摘要

背景氧化应激诱导的晶状体上皮细胞（LECs）凋亡与c—Jun氨基末端激酶（JNK）细胞信号通路有关；槲皮素能抑制JNK细胞信号通路并且有显著的抗氧化作用，但其对高压氧诱导的人LECs损伤有无保护作用有待研究。目的研究高压氧诱导人LECs凋亡的作用及槲皮素对高压氧处理的人LECs的保护作用，探讨JNK细胞信号通路在上述过程中的作用。方法人LECs细胞系SRA01／04在MEM培养基中进行培养，传至第3代进行实验。实验细胞分为空白对照组、高压氧组（体积分数99％O2＋体积分数1％CO2）、高压氧＋SP600125组和高压氧＋槲皮素组，实验前2h分别在后2个组人LECs培养基中加入20μmol／L JNK2特异性抑制剂（SP600125）或1μmol／L槲皮素预孵育，除空白对照组外，其他3个组于588kPa高压氧舱处理6h后收集人LECs。应用MTT法检测各组人LECs的细胞活力，以570nm处吸光度（A）值表示。用流式细胞仪以Annexin V—FITC试剂盒检测人LECs处理后各组细胞的凋亡率，通过Western blot法检测各组人LECs中JNK／p—JNK、c—Jun／p—c— Jun、caspase-3、caspase-9的蛋白表达情况。结果实验6h后，高压氧组、高压氧＋SP600125组、高压氧＋槲皮素组人LECs活力分别为0．450±0．083、0．654±0．079、0．649±0．090，明显低于空白对照组（0．835±0．082），差异均有统计学意义（P：0．001）；高压氧＋SP600125组、高压氧＋槲皮素组人LECs活力明显高于高压氧组（P=0．003、0．002）。高压氧组、高压氧＋SP600125组、高压氧＋槲皮素组人LECs凋亡数分别为19．77±1．44、8．45±0．93、7．79±0．78，明显高于空白对照组的3．17±0．74，差异有统计学意义（P=0．000）；高压氧＋SP600125组、高压氧＋槲皮素组人LECs细胞凋亡数明显少于高压氧组，差异均有统计学意义（P=0．000）。同时，高压氧组人LECs中p-JNK、p-c—Jun、oaspase-3和caspase-9蛋白的表达量明显高于空白对照组，差异均有统计学意义（P=0．000），而高压氧＋SP600125组、高压氧＋槲皮素组人LECs中p-JNK、p—c—Jun、caspase-3和caspase-9蛋白的表达量明显低于高压氧组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论JNK细胞信号通路在高压氧诱导的人LECs凋亡发生发展中起重要作用，SP600125和低浓度的槲皮素能抑制JNK细胞通路和细胞内源性凋亡途径，减轻高压氧引起的人LECs损伤。