雷帕霉素对TGF-β2诱导的人晶状体上皮细胞上皮-间叶样转化的抑制作用

摘要

目的：
　　 转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)上皮-间叶样转化(EMT)过程是后发性白内障(PCO)的重要发病机制，因此寻求有效抑制这一作用的药物对于防治PCO有重要意义。本研究欲观察雷帕霉素(RAPA)对TGF-β2诱导的人LECs的EMT的抑制作用，为进一步研究PCO的发病机制及PCO的防治提供依据。
　　 方法：
　　 采用含体积分数10％胎牛血清的DMEM高糖细胞培养液对人LECs系SRA01/04进行体外培养，分别用质量浓度为10、100、1000、10000 ng/ml的RAPA处理人LECs72h，MTT法检测各浓度组人LECs的吸光度值（A490值）以评估人LECs的增殖情况并计算RAPA对细胞生长的抑制率。将体外培养的人LECs分为阴性对照组、TGF-β2(5ng/ml)组和TGF-β2+RAPA组，TGF-β2+RAPA组按质量浓度(10ng/ml;100ng/ml;200ng/ml;400ng/ml)分为四个亚组，48h后，采用RT-PCR法和Western blot法分别检测人LECs中EMT的标志物—平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮性钙黏附蛋白(E-cad)的表达水平。选取TGF-β2+400ng/ml RAPA分别作用于人LECs24、48、72 h，采用Western blot法检测人LECs中α-SMA、E-cad的表达水平。
　　 结果：
　　 MTT结果显示RAPA对人LECs有明显的生长抑制作用，差异有统计学意义(F=101.920，P=0.000)，1000 ng/ml组的抑制率高达41.18％。 RT-PCR和Western blot检测结果显示阴性对照组中α-SMA mRNA及其蛋白仅有少量表达，加入TGF-β2后可见α-SMA mRNA及其蛋白表达量明显增加，不同质量浓度RAPA作用于人LECs后，随着RAPA质量浓度增加，人LECs中α-SMA mRNA及蛋白的表达量均逐渐减少，但E-cad mRNA及其蛋白表达逐渐增多，差异均有统计学意义(α-SMAmRNA: F=294.660, P=0.000;α-SMA蛋白:F=346.950, P=0.000; E-cad mRNA:F=264.250，P=0.000; E-cad蛋白:F=317.327，P=0.000)。400 ng/ml RAPA作用于人LECs后，随着作用时间的延长，α-SMA蛋白的表达量逐渐下降，而E-cad蛋白的表达量逐渐增加，差异均有统计学意义(α-SMA: F=693.864，P=0.000; E-cad:F=369.286,P=0.000)。
　　 结论：
　　 RAPA可抑制体外培养的人LECs增生，其作用呈剂量依赖性，此外RAPA具有抑制TGF-β2诱导的人LECs上皮-间叶样转化的作用，其作用呈剂量和时间依赖性。

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