柚皮素β-环糊精包合物对大鼠实验性脉络膜新生血管的抑制作用

摘要

背景脉络膜新生血管（CNV）是导致多种眼底疾病致盲的主要原因，目前仍无有效的治疗方法。研究表明柚皮素能够抑制CNV的发生和发展，但由于其水溶性差而影响其生物利用度。β-环糊精（β-CD）可提高药物的水溶解度，但其与柚皮素包合后是否能改善柚皮素抑制CNV的作用尚不清楚。目的制备柚皮素β-CD包合物，比较其与柚皮素对大鼠CNV的抑制作用。方法采用饱和溶液法制备柚皮素β-CD包合物，依据标准曲线法测定包合物中柚皮素的水溶解度。采用随机数字表法将32只SPF级健康雄性Brown—Norway大鼠分为正常对照组、模型对照组、柚皮素组和柚皮素β-CD组，每组8只。采用氪激光法在模型对照组、柚皮素组及柚皮素β-CD组大鼠右眼制作CNV模型。于视网膜光凝当天起柚皮素组和柚皮素β-CD组大鼠腹腔内分别注射20mg／kg柚皮素和相同质量浓度柚皮素的β-CD包合物，每日1次，连续4周，模型对照组大鼠腹腔注射等容积的DMSO。给药后第4周经大鼠食下静脉注射荧光素异硫氰酸酯葡聚糖（FITC—D），制备脉络膜铺片，测量大鼠CNV面积；从各组大鼠实验眼分离出视网膜色素上皮（RPE）-脉络膜-巩膜复合体组织标本，分别采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测标本组织中血管内皮生长因子（VEGF）、环氧化酶-2（COX-2）、磷脂酰肌醇（-3）激酶（PI3K）、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9 mRNA及其蛋白的相对表达量。结果柚皮素经β-CD包合后在水中的溶解度较原药提高了11．8倍。模型对照组、柚皮素组和柚皮素β-CD组CNV面积分别为（34．56±1．67）、（20．90±1．47）和（13．20±1．38）×103μm2，柚皮素组、柚皮素β-CD组大鼠CNV面积明显小于模型对照组，差异均有统计学意义（t=3．973，P〈0.05；t=5．532，P〈0．01），柚皮素β-CD组大鼠CNV面积小于柚皮素组，差异有统计学意义（t=3．605，P〈0.05）。正常对照组、柚皮素组和柚皮素β—CD组标本织中VEGF、COX-2、PI3K、p38MAPK、MMP-2、MMP-9 mRNA及其蛋白的相对表达量明显低于模型对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；柚皮素β-CD组标本组织中VEGF和COX-2 mRNA及其蛋白的相对表达量明显低于柚皮素组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论柚皮素经β-CD包合后水溶性显著增加，其对大鼠CNV的抑制作用较原药显著增强，柚皮素对CNV的抑制可能是通过其对炎症信号通路的抑制作用来实现的。