重组胸腺素β4在干眼模型中对炎症反应的调节作用及对眼表修复的影响

摘要

背景研究证实炎症与干眼的发生和发展相关，其中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和γ干扰素（IFN-γ）是重要的炎症因子。胸腺素β4（Tβ4）具有促进上皮细胞迁移和抑制炎症反应的作用，但其对干眼眼表修复的影响及其机制尚未阐明。目的观察重组Tβ4对干眼模型鼠眼中TNF-α和IFN-γ表达的调控作用及其对眼表修复的影响。方法选用清洁级雄性成年SD大鼠50只，用质量分数0.3%苯扎氯铵溶液连续点左眼7 d以诱导干眼模型，以泪膜破裂时间（BUT）、角膜荧光素染色评分、Schirmer试验Ⅰ（SⅠt）结果评估造模情况。将造模成功的36只眼按随机数字表法分为模型对照组、重组人表皮生长因子（rhEGF）点眼组、Tβ4点眼组及PBS点眼组，按照分组分别用5 μl Tβ4溶液（9 μg/ml）、rhEGF滴眼液、无菌PBS点眼，每日3次，连续7 d，大鼠右眼不进行任何干预作为正常对照组。各组大鼠均于点眼后7 d行BUT、角膜上皮荧光素染色和SⅠt检查。点眼后7 d以过量麻醉法处死动物，制备大鼠眼表组织切片，采用苏木精－伊红染色法观察各组大鼠角膜和结膜组织形态学变化；采用过碘酸希夫染色法计数结膜组织中杯状细胞的数目；透射电子显微镜下观察大鼠角膜和结膜细胞超微结构改变；分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测大鼠结膜组织中TNF-α mRNA和IFN-γ mRNA及其蛋白的表达。结果正常对照组、模型对照组、rhEGF点眼组、Tβ4点眼组和PBS点眼组大鼠BUT分别为（10.42±0.66）、（7.46±0.49）、（8.71±0.50）、（9.59±0.35）和（8.63±0.68）s，总体比较差异有统计学意义（F＝5.65，P＝0.00），其中模型对照组大鼠BUT明显短于正常对照组，rhEGF点眼组和Tβ4点眼组大鼠BUT明显较模型对照组大鼠延长，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。各组间大鼠SⅠt和角膜荧光素染色评分的总体比较差异均无统计学意义（F＝0.42，P＝0.79；F＝136.77，P＝0.00）。苏木精－伊红染色显示，模型对照组大鼠角膜、结膜上皮缺损，角膜基质层水肿；rhEGF点眼组和Tβ4点眼组大鼠角膜、结膜上皮细胞形态不规则，呈过度增生状。各组大鼠结膜组织中杯状细胞数量的总体比较差异有统计学意义（F＝3.16，P＝0.04），其中模型对照组和rhEGF点眼组大鼠结膜组织中杯状细胞数量均明显低于正常对照组，差异均有统计学意义（均P〈0.05），而Tβ4点眼组大鼠结膜杯状细胞数量与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。透射电子显微镜下观察可见，模型对照组大鼠角膜、结膜上皮细胞的微绒毛和微皱襞肿胀、融合、卷曲、断裂和脱落，Tβ4点眼组角膜、结膜上皮细胞微绒毛呈增生修复状态。各组大鼠结膜组织中TNF-α mRNA和IFN-γ mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义（F＝43.08、371.69，均P＝0.00），各组大鼠结膜组织中TNF-α和IFN-γ蛋白表达量总体比较，差异均有统计学意义（F＝34.27、43.52，均P＝0.00），其中模型对照组大鼠结膜组织中TNF-α mRNA和IFN-γ mRNA及其蛋白的表达量均明显高于正常对照组，而Tβ4点眼组上述因子的表达量均明显低于模型对照组和rhEGF点眼组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论Tβ4局部点眼可通过下调干眼大鼠结膜组织中TNF-α和IFN-γ的表达而增加泪膜的稳定性，促进眼表损伤的修复。