含密码子优化型HIV-1 gp120基因重组腺病毒的构建及其免疫效果研究

摘要

目的构建能表达野生型和密码子优化型人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)B亚型中国流行株gp120基因的非复制型腺病毒.方法按哺乳动物细胞偏好的密码子对HIV-1 B亚型中国流行株Ch gp42的gp120基因进行优化,合成优化基因.将野生型和密码子优化的gp120基因插入穿梭质粒,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coli BJ5183,获得重组子,转染293细胞后获得重组病毒.分别以两种重组腺病毒疫苗免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清中的特异性抗体,乳酸脱氢酶法检测小鼠细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应.结果获得两株重组腺病毒rad-wt.gp120和rAd-mod.gp120,能正确表达Gp120.rAd-mod.gp120比rAd-wt.gp120蛋白表达水平明显提高.重组腺病毒免疫小鼠后能产生HⅣ-1特异性的抗体及CTL反应,rAd-mod.gp120组明显优于rAd-wt.gp120组结论成功构建了表达野生型和密码子优化的HIV-1 gp120基因的重组腺病毒,能诱导HIV-1特异性体液和细胞免疫反应.