B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株HA基因重组3型腺病毒的构建

摘要

目的：构建包含有B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株血凝素(HA)基因的重组3型腺病毒。 方法：用PCR方法扩增得到HA基因，酶切后克隆至3型腺病毒穿梭质粒pSK-CMV，构建重组穿梭质粒pSK-CMV-HA，然后在大肠杆菌BJ5183内进行经Not Ⅰ和EcoR Ⅴ线性化的pSK-CMV-HA和经Rsr Ⅱ线性化的骨架质粒pBRAdV3△E3的同源重组， AsiS Ⅰ酶切线性化重组腺病毒质粒pBRAdV3△E3-HA后脂质体法转染HEp-2细胞，进行病毒包装和增殖后得到重组腺病毒rAdV3△E3-HA，并且通过病变观察、扫描电镜、RT-PCR、免疫细胞化学方法对基因组的包装和HA基因的表达进行检测。 结果：将HA基因克隆入pSK-CMV获得重组穿梭质粒pSK-CMV-HA，线性化的pSK-CMV-HA与pBRAdV3△E3同源重组后获得pBRAdV3△E3-HA，线性化的pBRAdV3△E3-HA转染HEp-2细胞观察到细胞病变和HA基因的表达。 结论：成功构建了带有HA基因的重组腺病毒rAdV3△E3-HA，为B型流感病毒-3型腺病毒二联活苗的研究提供了依据。