腺病毒伴随病毒表达载体表达人乳头瘤病毒18型E6E7基因构建及其转化作用的鉴定

摘要

目的 探讨人乳头瘤病毒 （HPV）的E6E7基因在细胞恶性转化中所起的作用。方法 将人乳头瘤病毒 （HPV）的E6E7基因克隆至腺病毒伴随病毒表达载体中 ,通过包装的重组病毒感染 ,将E6E7基因导入并整合到永生 2 93细胞的基因组中。结果 本研究成功地构建了HPV18E6E7AAV病毒并感染了永生 2 93细胞 ,PCR Southern杂交分析表明E6E7基因在转化细胞 2 93TL中确有表达 ,转化细胞 2 93TC和 2 93TL具有明显的转化表型 ,和亲本 2 93细胞相比 ,生长速度快 ,接触抑制消失 ,集落形成率提高 2 0倍 ,且集落明显增大 ,形成时间短。结论 成功地构建了HPV18E6E7AAV病毒 ,HPV18E6E7基因可引起永生化人上皮细胞 2 93的恶性转化。此病毒可用于感染正常上皮细胞 ,研究其致癌机制