DON对体外培养软骨细胞炎性细胞因子、CD44、MMP-13及整合素表达的影响

摘要

目的观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对体外培养软骨细胞炎性细胞因子、人类白细胞分化抗原(CD)44、基质金属蛋白酶(MMP)-13、整合素表达的影响。方法提取1~2日龄Wistar乳鼠原代软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色法进行软骨细胞鉴定,CCK-8法检测DON(剂量分别为0.0、0.1、0.2、0.4、0.8μg/ml)染毒24、48、72 h软骨细胞增殖情况,根据细胞存活率选取0.00(对照)、0.05、0.10、0.15、0.20μg/ml DON用于后续实验,确定作用时间为48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清液白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、CD44及MMP-13含量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测软骨细胞CD44和整合素α2、α5、β1蛋白表达水平。结果随着DON剂量和作用时间增加,软骨细胞存活率逐渐降低,存在浓度和时间依赖性(P均<0.01)。细胞培养上清液IL-6含量组间比较差异有统计学意义(H=13.425,P<0.01),其中0.10μg/ml组[中位数(四分位数间距):256.89(191.02,477.58)pg/ml]显著高于对照组[10.37(0.00,119.13)pg/ml,P<0.05];IL-1β和TNF-α含量组间比较差异无统计学意义(F=0.881、1.317,P均>0.05);0.10、0.15、0.20μg/ml组CD44含量[(0.87±0.21)、(0.85±0.24)、(0.77±0.17)pg/ml]明显低于对照组[(1.06±0.19)pg/ml,P均<0.05];MMP-13含量组间比较差异有统计学意义(F=7.947,P<0.01)。CD44和整合素α2、α5、β1蛋白表达水平组间比较差异有统计学意义(F=5.737、6.562、6.074、4.476,P<0.05或<0.01)。结论DON可能通过增加IL-6,MMP-13,整合素α2、β1表达和抑制CD44、整合素α5表达,破坏细胞与细胞外基质间的平衡,造成软骨损伤。