骨碎补总黄酮对大鼠成骨细胞增殖、分化及细胞外信号调节激酶表达的影响

摘要

目的观察骨碎补总黄酮（totalflavonoidsindrynariafortunei，TFDF）对大鼠成骨细胞增殖、分化及细胞外信号调节激酶（extracellularsignal．regulatedkinase，ERK）表达的影响。方法选择10月龄SD雄性大鼠，按体质量采用随机数字表法分为5组：空白对照组，阳性对照组，低、中、高剂量组，每组8只。空白对照组给予等溶生理盐水灌胃；阳性对照组给予蒸馏水配制的骨松宝溶液，灌胃剂量为5．710g·kg-1·d-1；低、中、高剂量组给予蒸馏水配制的TFDF溶液，灌胃剂量分别为0．054、0．108、0．216g·kg-1·d-1。5组连续灌胃8d，末次灌胃后1．5h，大鼠麻醉处死，无菌心脏取血，提取上清，同组混匀，56℃水浴30min灭活补体，滤膜除菌分装血清用于成骨细胞培养。成骨细胞来自3～5日龄SD乳鼠股骨，DMEM培养液冲洗骨髓腔，吹打制备单细胞悬液，采用三维细胞培养系统体外培养大鼠成骨细胞。在无血清DMEM培养后，分别用含上述血清的培养基培养，采用倒置相差显微镜观察成骨细胞形态学变化，噻唑蓝（MTT）法检测成骨细胞增殖情况，对硝基苯磷酸盐（PNPP）法测定碱性磷酸酶（AIP）活性，PCR法测定ERK1、ERK2mRNA表达。结果成骨细胞增殖能力组间比较差异有统计学意义（F=8．850，P〈0．05），其中阳性对照组，低、中、高剂量组（0．329±0．004、0．302±0．038、0．342±0．010、0．353±0．006）明显高于空白对照组（0．272±0．005，P均〈0．05）。中、高剂量组高于低剂量组（P均〈O．05）。成骨细胞ALP活性组间比较差异有统计学意义（F=13．406，P〈0．05），其中阳性对照组，中、高剂量组[（15．60±0．38）、（14．62±0．36）、（13．48±0．18）U／mgpro]明显高于空白对照组、低剂量组[（6．34±0．16）、（8．68±0．35）U／mg pro，P均〈0．05]，低剂量组高于空白对照组（P〈0．05）。成骨细胞ERKl、ERK2mRNA表达组间比较，差异有统计学意义（F=19．452、15．306，P均〈0．05），其中阳性对照组（2．407±0．022、2．026±0．014）、中剂量组（2．385±0．018、2．018±0．020）明显高于空白对照组（1．032±0．016、0．968±0．018，P均〈0．05）。结论TFDF可促进成骨细胞的分化成熟，其作用机制可能与ERK通路相关。