RNA干扰靶向抑制结缔组织生长因子拮抗肾脏纤维化的发展

摘要

目的研究RNA干扰靶向抑制结缔组织生长因子（CTGF）对高血压大鼠肾脏纤维化指标的影响。方法本研究于2006-2008年在武汉协和医院心血管病研究所完成,实验以自发性高血压大鼠（SHR）为动物模型,随机（随机数字法）分为未干预的SHR组（n=10）和RNA干扰组（RNAi组,n=10）,并设置WKY大鼠（n=8）为正常对照组。构建并筛选出靶向大鼠CTGF的RNAi质粒重组体,通过升主动脉钳夹冠脉灌注法联合尾静脉注射将质粒转染至大鼠体内,RNA干扰结束后,获取肾脏标本,RT-PCR和Western blotting检测肾脏组织CTGF及纤维连接蛋白（FN）的mRNA和蛋白表达,免疫组化技术分析CTGF及FN在肾脏的空间表达。0.1%天狼星红-饱和苦味酸胶原染色分析肾组织胶原类型及代谢水平（以胶原容积分数CVF表示）,比色法测定肾脏组织羟脯氨酸含量。所有数据以（x±s）表示,多个均数的组间比较采用单因素方差分析,以P＜0.05为有统计学意义。结果 RNA干扰使高血压大鼠肾脏组织CTGF的mRNA和蛋白表达分别下调66%和62%（P＜0.01）,FN mRNA和蛋白的表达也相应降低达56%和51%（P＜0.01）;免疫组化显示了同样的抑制效应,而且观察到CTGF及FN不同的空间表达,CTGF在肾实质和间质中均可表达,而FN主要在肾脏间质表达。天狼星红染色显示RNA干扰组胶原沉积减少,偏光显微镜下进一步观察到RNA干扰主要抑制了Ⅰ型胶原的合成;肾脏组织羟脯氨酸含量在RNA干扰组显著减少[SHR组:（0.596±0.067）μg/mg,RNAi组:（0.368±0.084）μg/mg,P＜0.01]。结论 CTGF靶向性RNA干扰显著下调肾组织中CTGF的表达并相应抑制细胞外基质在肾间质的沉积,且这种效应独立于降压之外。提示CTGF在肾脏纤维化发生及进展中起着关键作用。