Chromofungin抑制TNF-α诱导血管内皮通透性增加的钙信号机制

摘要

目的探讨嗜铬粒蛋白A（chromogranin A,CGA）衍生多肽Chromofungin（CHR）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导血管内皮细胞钙内流的影响。方法以人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞为研究对象,建立TNF-α刺激炎症模型,实验分为对照组、TNF-α组、10 nmol/L CHR+TNF-α组、100 nmol/L CHR+TNF-α组和1 000 nmol/L CHR+TNF-α组。Transwell小室法检测EA.hy926细胞通透性,激光共聚焦法检测EA.hy926细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果与对照组比较,TNF-α组明显增加EA.hy926细胞通透性[（1.189±0.086）vs.（1.771±0.195）,t=4.343,P=0.01];10 nmol/L、100 nmol/L和1 000 nmol/L CHR抑制TNF-α诱导的EA.hy926细胞通透性增加,其中10 nmol/L和100 nmol/L CHR显著降低TNF-α诱导的EA.hy926细胞高通透性[（1.771±0.195）vs.（1.315±0.134）,t=3.403,P=0.042;（1.771±0.195）vs.（1.236±0.181）,t=3.985,P=0.017],1 000 nmol/L CHR降低TNF-α诱导的EA.hy926细胞高通透性,差异无统计学意义[（1.771±0.195）vs.（1.411±0.255）,t=2.679,P=0.126]。10nmol/L、100 nmol/L和1 000 nmol/L CHR作用于EA.hy926细胞时细胞内Ca2+浓度无明显变化。TNF-α诱导EA.hy926细胞外Ca2+快速内流,各时间点细胞内Ca2+荧光强度Ft40、Ft100与起始荧光值Ft30比较,差异具有统计学意义[荧光强度分别为:（41.497±3.788）vs.（56.193±3.082）,F=196.129,P=0.000;（41.497±3.788）vs.（53.457±4.536）,F=101.19,P=0.000],10nmol/L、100 nmol/L和1 000 nmol/L CHR能够抑制TNF-α引起的Ca2+快速内流。结论 CHR抑制TNF-α诱导的EA.hy926细胞通透性增加,这一作用可能是通过阻止TNF-α诱导的细胞外Ca2+内流来实现的。