软骨细胞对滑膜间充质干细胞诱导分化的影响

摘要

目的 明确软骨细胞对滑膜间充质干细胞(synovial mesenchymal stem cells,SMSCs)向软骨细胞诱导分化情况的影响. 方法 (1)消化分离原代软骨细胞和SMSCs,测定细胞存活率、计数并传代培养.显微镜下观察各代软骨细胞和SMSCs生长情况,并对软骨细胞和SMSCs进行类别鉴定.(2)取第1代兔软骨细胞和第3代SMSCs共培养,第3代SMSCs单独培养作为对照组.(3)5d、10 d后分别对SMSCs进行免疫荧光、免疫组化和流式细胞仪检测,通过观察SMSCs对Ⅱ型胶原的表达情况,了解软骨细胞诱导SMSCs向软骨细胞分化的影响. 结果 (1)原代软骨细胞刚分离初为卵圆形,贴壁后呈三角形或梭形.每100 mg软骨组织可分离出原代软骨细胞为3～5×105个,细胞存活率为90.0％.甲苯胺蓝染色后细胞质内可见散在蓝紫色异染颗粒.(2)原代滑膜细胞刚分离初为圆形,贴壁生长后可见少量较大卵圆形细胞和较多梭形细胞,传代后几乎都为梭形.每100 mg滑膜组织可分离出原代滑膜细胞为1～2×106个.SMSCs表面抗原CD68、CD90和CD105检测阳性率分别为0.5％、92.5％和90.7％.(3)对SMSCs的免疫组化、检测显示,与第1代软骨细胞共培养5d、10d后的第3代SMSCs对于Ⅱ型胶原的表达阳性率比单一生长的第3代SMSCs要高.(4)对SMSCs的流式细胞仪检测显示,与第1代软骨细胞共培养5d、10d后的第3代SMSCs对于Ⅱ型胶原的表达阳性率比单一生长的第3代SMSCs要高,并与免疫组化、检测的结果相吻合.结论 与第1代软骨细胞共培养的SMSCs对Ⅱ型胶原表达持上升,出现向软骨细胞分化的现象.软骨细胞能较好地诱导SMSCs向软骨细胞分化.