茶黄素和转化生长因子β_1对兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞增殖及诱导分化的影响

摘要

背景:已有大量的实验报道,转化生长因子β1能体外促进骨髓间充质干细胞向软骨细胞转化,而茶黄素在细胞转化过程中起重要作用。目的:拟验证在茶黄素和转化生长因子β1的协同作用下,骨髓间充质干细胞向软骨细胞转化是否优于单纯使用转化生长因子β1。设计、时间及地点:干细胞生物学实验,于2008-05/08在安徽省立医院中心实验室完成。材料:健康8周龄新西兰大白兔,获取骨髓间充质干细胞进行分离和原代培养。方法:取第3代骨髓间充质干细胞,分为3组:对照组:完全培养基加地塞米松10-8mmol/L、维生素C10mmol/L。转化生长因子组:完全培养基加地塞米松10-8mmol/L、转化生长因子?15μg/L、维生素C10mmol/L。茶黄素组:完全培养基加地塞米松10-8mmol/L、转化生长因子β15ng/mL、维生素C10mmol/L、茶黄素30mg/L。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长状况及形态变化,甲苯胺蓝染色、阿利新蓝比色法测定各板每孔中葡萄糖氨基聚糖含量、免疫检测仪测定3组的吸光度值。结果:骨髓中分离获得的骨髓间充质干细胞在体外增殖旺盛,转化生长因子β1和茶黄素诱导后细胞生长明显减缓。加入诱导液后,转化生长因子组和茶黄素组,可见细胞小结形成,茶黄素组细胞小结明显增多并在局部形成多个呈放射状细胞集落,而对照组未见明显变化。免疫组化染色后转化生长因子组细胞呈阳性、茶黄素组细胞呈强阳性,对照组未见阳性细胞。与对照组比较,转化生长因子组、茶黄素组吸光度值明显增(P<0.01),茶黄素高于转化生长因子组(P<0.05),差异有统计学意义。结论:茶黄素在转化生长因子β1存在的条件下能有效促进骨髓间充质干细胞在体外向软骨细胞分化。