人胰岛细胞瘤cDNA文库的构建

摘要

采用一种简单高效的互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ）克隆技术制备人胰岛细胞瘤的ｃＤＮＡ文库。方法的主要过程如下：以人胰岛细胞瘤的Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋－ＲＮＡ为模板，以含ＮｏｔＩ切点的ｏｌｉｇｏ－（ｄＴ）１５为引物，在反转录酶作用下合成第一股单链ｃＤＮＡ；用Ｅ．ｃｏｌｉ ＲＮａｓｅＨ除去Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋－ＲＮＡ，并以Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ＩＥ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ Ｌｉｇａｓｅ和Ｔ４ＤＮ