GDF5基因真核表达载体的构建及其在恒河猴骨髓间充质干细胞中的表达

摘要

目的 克隆人软骨组织生长分化因子5(GDF5)基因及构建GDF5基因真核表达载体,观察其在恒河猴骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达情况.方法 采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人胎儿软骨组织克隆hGDF5基因全长cDNA,插入pEGFP-C2载体,构建重组真核表达质粒pEGFP-C2-GDF5.重组质粒脂质体介导法转染MSCs细胞,荧光显微镜观察报告基因的表达,RT-PCR法检测目的基因表达.结果 成功克隆人软骨组织GDF5基因和构建GDF5真核表达质粒pEGFP-C2-GDF5,克隆在载体上的基因长度为1 505 bp,包含全部eDNA编码序列1505 bp,测序显示与Genbank上的序列一致.重组质粒转染恒河猴MSCs细胞得到表达,绿色荧光蛋白在转染24 h后开始表达,72 h达高峰,然后表达逐渐减弱.转染后72 h可检测到GDF5 mRNA表达.结论 人GDF5基因在恒河猴MSCs细胞的成功表达为应用恒河猴模型开展基于细胞的基因疗法修复骨和软骨损伤研究奠定了必要基础.