Sox2基因真核表达载体的构建及转Sox2基因绵羊骨髓间充质干细胞系的建立

摘要

Sox2是多能干细胞的主要标记之一,有研究发现高表达Sox2基因的神经干细胞作为供体细胞进行核移植时具有较高的重编程能力.本研究旨在通过对绵羊骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)Sox2基因进行外源性增强表达,以期提高其重编程能力,从而改善动物体细胞克隆效率.试验提取绵羊胎儿生殖腺组织RNA,以其为模板克隆Sox2基因cDNA序列,装入真核表达载体pEGFP-N1,构建出pEGFP-N1-Sox2表达载体.经脂质体转染将重组质粒转染入绵羊BMSC,经G418与荧光标记双筛选后挑选单克隆并扩增培养.测序鉴定表明,克隆得到绵羊Sox2基因CDS区全长,重组质粒构建成功;荧光检测表明,成功建立表达Sox2基因的绵羊BMSC系.本研究得到了高表达Sox2基因的绵羊BMSC系,为提高体细胞克隆过程中的重编程效率提供了新思路.