胞嘧啶脱氨酶基因真核表达载体的构建及转染人骨髓间充质干细胞的研究

摘要

目的:(1)克隆酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosinedeaminase，YCD)基因FCY1片段，构建pcDNA3.1-FCY1真核表达载体。(2)检测其在人骨髓间充质干细胞(Human Bone marrow-derivedmesenchymal stem cells，BMSCs)的表达。
　　方法:(1)从酿酒酵母菌基因组DNA中克隆FCY1基因CDS区全序列，构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-His A+-FCY1。(2)通过用PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定。(3) Percoll密度梯度离心法从人骨髓中分离BMSCs，贴壁培养，从形态学特征、流式分析细胞免疫表型、特异性基因表达对BMSCs进行鉴定。(4)脂质体介导转染BMSCs并通过RT-PCR检测其在BMSCs中的表达。
　　结果:(1)经PCR扩增、酶切电泳分析和DNA测序证实，本实验构建的重组质粒目的基因片段为YCD基因FCY1-cDNA。(2)分离的人BMSCs经流式细胞法、RT-PCR等检测后所得结果符合BMSCs特性。(3)经RT-PCR证实，转染pcDNA3.1-FCY1后的人骨髓间充质干细胞内有大量FCY1 mRNA的转录。
　　结论:1）本实验成功构建FCY1真核表达质粒并在人骨髓间充质干细胞中得到表达。(2)骨髓间充质干细胞有望成为胞嘧啶脱氨酶基因治疗中的理想载体。

目录

摘要

1．前言

2．材料与方法

2．1．主要仪器设备

2．2 主要试剂

2．3 所用引物设计

2．4 主要试剂的配制

2．5 主要应用软件

2．6 实验方法

3．结果

4．讨论

参考文献

致谢

声明

主要英文缩略语

附[综述]C D／5—FC自杀基因治疗肿瘤的研究进展